第三章 细胞破碎 应国清老师课件.pptVIP

第三章 细胞破碎方法 一、细胞壁的组成和结构 细菌类 组成—肽聚糖（多糖、氨基酸）、脂类 肽聚糖是细菌细胞壁的主要成份，它是由N-乙酰胞壁酸(NAM)、N-乙酰葡萄糖胺(NAG)和肽“尾”(一般是4个氨基酸)组成，NAM与NAG通过β-1.4糖苷键相连，肽“尾”则是通过D-乳酰羧基连在NAM的第3位碳原子上，肽尾之间通过肽“桥”(肽键或少数几个氨基酸)连接，NAM、NAG、肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的多层网状结构 结构—多层三维网状结构 革兰氏阴性和阳性的差别（厚度、紧密度、是否有外膜） 2、霉菌类 组成—几丁质（N-乙酰葡聚糖胺的聚合物）、葡聚糖、蛋白质、脂类等 结构—四层三维网状结构 二、细胞破碎方法 1、细胞破碎方法分类 机械破碎法（高压匀浆法、高速珠磨法、超声波法等 ） 非机械破碎法（化学法、酶解法、渗透压法、冻融法、干燥法等 ） 2、机械破碎法 2.1 高压匀浆法 定义—利用高压细胞悬浮液因减压所产生的剪切力而达到细胞破碎的过程 工作原理：液－液剪切力、压力差等 特点： 适用对象广 工业化、实验室中应用 细胞完全破碎 2.2 高速珠磨法 定义—利用由高速转动的珠子所产生的剪切力而达到细胞破碎的过程 工作原理：固－固剪切力、液－固剪切力等 特点： 适用对象较广 工业化、实验室中应用 细胞完全破碎 需冷却 2.3 超声波法 定义—利用超频率声波（15-25kHz）在液体介质中传播所产生的剪切力而达到细胞破碎的过程 工作原理：空穴现象 特点： 适用对象一般 仅实验室中应用 细胞完全破碎 需冷却，噪音 3、非机械破碎法 3.1 化学（脂溶）法 定 义——采用某些化学试剂改变细胞壁和膜的通透性，使内含物有选择性地释放出来的过程 原 理： 酸碱 有机溶剂 表面活性剂 螯合剂 3.2 酶解法 定义—利用酶促反应分解细胞壁上的键而达到细胞破碎的过程 原理 外源性酶解—溶菌酶、糖苷酶（β-1,4、 β –1,6）、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、蛋白水解酶、α-淀粉酶、纤维素酶、脂酶等 内源性酶解（自溶）——温度、pH、时间、缓冲液浓度、激活剂等 3.3 渗透压法 3.4 冻融法 3.5 干燥法 三、机械法与非机械法破碎的比较 四、细胞碎片悬浮液的固液分离 膜分离——微滤、超滤等 高速离心 密度梯度离心—在高速离心场作用下，样品中各组分依据其密度不同在连续或非连续密度梯度的介质中形成等密度区带排列的过程 工作原理 d2 V = —— (ρs—ρ) ω2 r 18μ 双水相萃取 定义—利用物质在互不相溶的两水相分配系数的差异进行分离纯化的过程 五、破碎率及其测定方法 破碎率（R）=C / Cm ( %, mg/g ) ln [R / (1-R)] = K t 测定方法 直接测定法 目的产物测定法 导电率测定法 思考题 1、细菌细胞壁与真菌（酵母）细胞壁在组成上有何区别？ 2、细胞破碎主要有那几种方法？ 3、机械法细胞破碎方法非机械破碎方法相比有何特点？ 4、何谓脂溶破碎法？其原理是什么？包括那几种？ 5、酶法细胞破碎常用那几种酶类？ * * 一、细胞壁的组成和结构 3、酵母菌类 组成—甘露聚醇、葡聚糖、蛋白质、脂类等 结构—三层三维网状结构 实验研究 工业化、实验 应用范围 无 专用 设备 低 高 粘度 较大 细小 碎片大小 部分（有选择） 全部 内含物释放 溶解局部壁膜 切碎细胞 机理 非机械法 机械法 项目 四、细胞碎片悬浮液的固液分离