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中国海洋大学海洋生命学院 生物化学讲义 2008 年修订 第十六章 柠檬酸循环 目的和要求：掌握柠檬酸循环的过程、机理、能量代谢、调节和生理意义；了解柠檬酸循环的 回补反应和乙醛酸循环途径。 一、柠檬酸循环概貌 柠檬酸循环的大致轮廓：碳骨架变化，化学结构式的变化 关键的反应物柠檬酸的存在,称柠檬酸循环；循环过程中有三种羧酸化合物参与,称三羧酸循环或TCA 循环；Krebs 循环,为纪念Hans Krebs 真核生物线粒体发生 二、柠檬酸循环的反应机制 ㈠、草酰乙酸与乙酰CoA 缩合形成柠檬酸 柠檬酸合酶，两个亚基构成的二聚体,每个亚基的两个结构域形成一个裂缝，活性部位有组氨酸残基， 变构酶,活性受ATP,NADH,琥珀酸CoA,酯酰CoA 抑制,该途径中第一个调控,限速步骤 反应机理： 致死性合成反应 该步反应特点：参与反应的酶为柠檬酸合酶；放能的不可逆反应,柠檬酸循环中第一个调控限速步骤； 氟乙酸产生致死性合成反应 ㈡、柠檬酸异构化形成异柠檬酸 顺乌头酸酶，催化可逆反应，活性中心有Fe-S 聚簇 ㈢、异柠檬酸氧化形成α -酮戊二酸 异柠檬酸脱氢酶：NAD+为辅酶： 线粒体，Mg2+或Mn2+ ，NADP+为辅酶：线粒体和细胞溶胶；变构 调节酶，活性受能荷和NAD+/NADH (NADP+/NADPH)调节；细菌中异柠檬酸脱氢酶受磷酸化和去 磷酸化的共价修饰调节 反应机理 该步反应特点：异柠檬酸脱氢酶催化该反应；柠檬酸循环中第一次氧化作用,第一次脱羧；第二个调 控步骤 ㈣、α -酮戊二酸生成琥珀酰-CoA α -酮戊二酸脱氢酶系：α -酮戊二酸脱氢酶(E1) ；二氢硫辛酰转琥珀酰酶(E2)；二氢硫辛酰脱氢酶(E3) ； 需要六种辅助因子:硫辛酸TPP,CoA,FAD,NAD+和Mg2+ ；受反应产物和能荷抑制调节,但E1 无修饰调 节。 催化反应机理与丙酮酸脱氢酶系相一致 该反应特点：α -酮戊二酸脱氢酶复合体催化此反应；第二次氧化脱羧反应；柠檬酸循环中第三个调 节步骤 ㈤、琥珀酰- CoA 转化成琥珀酸 该反应特点：琥珀酸CoA 合成酶(或琥珀酸硫激酶)催化，四聚体，催化反应可逆；唯一底物磷酸化 反应,产生1 摩尔ATP ㈥、琥珀酸脱氢形成延胡索酸 1 中国海洋大学海洋生命学院 生物化学讲义 2008 年修订 琥珀酸脱氢酶：辅基是FAD,辅基与酶以共价键结合；酶含有铁硫聚簇组分；催化反应具有立体专一 性；嵌入到线粒体内膜,线粒体内膜组成成分；丙二酸是其该酶的竞争性抑制剂 该反应特点：琥珀酸脱氢酶催化,是柠檬酸循环中唯一渗入线粒体内膜的酶,氢受体为FAD ，第三次氧 化还原反应 ㈦、延胡索酸水合形成L-苹果酸 延胡索酸酶：四个亚基，活性中心-SH，具有立体专一性,产生L-苹果酸 ㈧、L-苹果酸脱氢形成草酰乙酸 苹果酸脱氢酶，第四次氧化还原反应，NADH 三、柠檬酸循环总结 经历八步反应涉及八种酶 每一循环过程中两个碳原子以乙酰CoA 形式进入,两次脱酸反应脱掉两分子CO2 共有四次氧化反应，产生一分子ATP 和三分子NADH,一分子FAD 四、柠檬酸循环的生理意义 循环过程中产生ATP 和还原型NADH 和FADH2 ，进一步氧化分解产生ATP 循环过程中的中间产物在许多生物合成中充当前体原料。乙酰CoA可用来合成脂类物质；琥珀酰CoA 可用来合成卟啉环,进而合成血红素；草酰乙酸可用来合成丙酮酸,通过糖异生途径生成葡萄糖；草 酰乙酸,α-酮戊二酸等可用来合成氨基酸。 五、柠檬酸循环的回补反应 柠檬酸循环中间产物是许多生物大分子的前体: 乙酰CoA 可用来合成脂类物质；琥珀酰CoA 可用 来合成卟啉环,进而合成血红素；草酰乙酸可用来合成丙酮酸,通过糖异生途径生成葡萄糖；草酰