蛋白芯片技术检测病毒抗原和抗体的的研究4.pdfVIP

摘要 influenza 禽流感(Avianinfluenza,AI)由A型流感病毒(Avianvirus，AIV)引起，可感染多 种动物的一类传染病，禽类(家禽、野禽)是其主要的易感宿主。自1878年首次在意大利暴发， 目前禽流感已经在世界范围内分布，并且已经有人类感染禽流感的报道。鉴于禽流感对养殖业和 公共卫生的危害，禽流感的检测与防制直接关系到养禽业的发展和公共卫生问题，因此研究快速、 有效的检测方法一直备受关注。蛋白芯片(Protein 种新技术，它以蛋白代替DNA作为检测目的物，比基因芯片更接近生命活动的物质层面，因此 具有更加广阔的应用前景。 应。因此以NP作为抗原可以检测A型流感病毒抗体生成情况，对流感监测具有重要作用。本实 验在前人工作基础上利用禽流感NP基因真核表达的蛋白，经Ni+柱纯化和westernblot鉴定后， 点于醛基包被的载玻片上，并将胶体金技术与蛋白芯片技术相结合，采用胶体金间接标记的二抗 与待检血清结合，通过柠檬酸法进行显色，对禽流感病毒NP抗原芯片进一步验证应用。利用制 阴性，表明NP抗原芯片具有高度特异性和准确性，可以为AIV抗体检测提供新方法，并为制备 检测其它病原抗体的蛋白芯片奠定工作基础。 进一步开展了蛋白芯片技术检测AIV抗原的研究，初步建立一种用于鉴别禽流感病毒H5、 H7、H9亚型抗体芯片的方法。本实验利用蔗糖梯度密度离心方法，分别纯化AIV的H5、H7、 基包被的载玻片上，制备抗体芯片。优化一系列工作参数后，点样浓度在4m∥Inl，I％BSA封闭 50 对阴性尿囊液和AIV其它亚型尿囊液检测证明抗体芯片具有良好的特异性。利用稀释后的阳性尿 囊液探索抗体芯片敏感性表明抗体芯片可对原倍尿囊液和101稀释尿囊液实现鉴别诊断，而当稀 释lo-2后未能呈现荧光信号，并且抗体芯片对人工感染后的喉拭子和泄殖腔拭子样品也未能呈现 阳性信号。研究结果表明，利用抗体芯片检测AIV的H5、H7、H9亚型病毒具有可行性，但还 有很多问题需要解决，特别是需要进一步提高其灵敏性才有可能形成完善的诊断方法。 关键词：禽流感；蛋白芯片；检测 Abstract Avian causedinfluenzaA infecta ofdomestic influenza(AI)，which by viruses(AIr)，Canvariety andwild been reservoirsof waterfowls)haverecognized舔the animals．Birds(especially major influenzaAvirusesinnature．Sincefirstbeen in1878in has allovertheworld reported Italy,AIspread nOWandbecamea threattO andseveralhumanCaseSalsobeen major poultryindustry reported． AIVhave bothon controland of significantimplicationpoultry Therefore，successfullyprevention fast the and of andeffective methodsis