尖锐湿疣患者干扰素调节因子7和toll样受体9mrna的研究-study on interferon regulatory factor 7 and toll - like receptor 9 mrna in condyloma acuminatum patients.docxVIP

GeneratedbyUnregisteredBatchDOCTOPDFConverter2010.2.301.1358,pleaseregister!学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1. 交回学校授予的学位证书；2. 学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3. 本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4. 本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：日期：年月日指导教师签名：日期：年月日（本声明的版权归山西医科大学所有,未经许可,任何单位及任何个人不得擅自使用）前言尖锐湿疣(condyloma acuminate,CA）是由人乳头瘤病毒（HPV）感染引起的一种常见的性传播疾病，作为病毒感染性疾病，它的发生发展过程中存在着天然免疫和适应性免疫。 Toll 样受体(Toll-like receptors,TLRs)是天然免疫中重要的模式识别受体,通过识别不同病原体相关分子模式( PAMP) , 引发信号转导,导致多种炎症介质的释放,最终激活获得性免疫系统,在连接固有免疫与特异性免疫的过程中发挥着重要的桥梁作用[1]。现有的研究也表明IRFs 参与机体免疫应答、炎症反应、凋亡反应等多种生物学功能的调节,尤其在 IFN-α/β基因表达中起着重要的调节作用。截止目前IRF7与TLR9在尖锐湿疣发病中的作用国内外尚未见到报道，鉴于二者与固有免疫和适应性免疫存在有相关性，本研究采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从mRNA水平检测IRF7与TLR9在尖锐湿疣患者和正常人外周血的表达，探讨其在尖锐湿疣发病中的作用及其临床意义。材料与方法1.1标本来源所有入选病例来自于2009年12月～2010年6月山西医科大学附属第二医院皮肤科门诊的尖锐湿疣患者 25 例，其诊断依照卫生部防疫司制定的尖锐湿疣的诊断标准，并在实验前获得患者知情同意。全部病例均为初发的未采用任何治疗，且不合并有其它性传播疾病、自身免疫性疾病和系统性疾病。其中男16例，女9例；年龄17 ～65 岁，平均35.7岁。正常对照组20例来自于本院健康体检中心，其中男12例，女8例，年龄26～65岁，平均 36.6 岁,无内脏疾病和皮肤病,无近期感染史。两组受试者在性别、年龄上无统计学差异。1.2主要试剂人淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物制品科技有限责任公司，总RNA抽提试剂Trizol 购自美国Invitrogen公司；DEPC购自上海生工生物工程技术服务有限公司；TIANScriptRT 试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司；DNA Marker购自Fermentas公司；PCR引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成；琼脂糖(西班牙)。1.3主要仪器设备超低温冰箱日本三洋公司Biofuge Primo R台式低温离心机 KendroLaboratory Products DTC型PCR仪西安天隆科技有限公司GelDoc2000型紫外凝胶成像系统 BioRad公司LDZX-40型蒸汽灭菌器上海申安医疗仪器厂超净工作台SWCJCO 苏州净化设备有限公司 SZ-93自动双重纯水蒸馏器上海亚荣生化仪器厂 DYY-Ⅲ-5型稳压稳流电泳仪北京六一仪器厂1.4实验方法1.4.1外周血单一核细胞的分离（1）在无菌条件下用5ml无菌注射器抽取尖锐湿疣患者静脉血3ml，将其装入EDTA 抗凝管中；（2）将人淋巴细胞分离液加入装有3ml静脉血的试管中,放入离心机中2000r/min,10min高速离心；（3）将离心后中间的白膜层吸入另一试管中，加入PBS液，1000r/min,5min离心，外周血单一核细胞沉淀于试管底部；（4）弃上清液，将分离出的细胞放入eppendorff管中,-20℃冻存,待提取RNA。1.4.