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P53在卵巢粒层细胞瘤中的过度表达 齐鲁肿瘤杂志 1998年第3期第5卷 论著摘要 作者：崔保霞　张文尧　江　森　杨兴升　张振国 单位：济南市（250012）山东医科大学 附属医院 　　近10年来，卵巢癌的分子生物学进展迅速，发现了癌基因及抑癌基因的作用，其中以抑癌基因P53的研究最为广泛和深入。但大多数研究集中于卵巢上皮性癌，而对卵巢粒层细胞瘤（Granulosea cell Tumors,GCT)P53过度表达的研究国内尚未见报道。本研究采用免疫组织化学方法检测了P53在25例卵巢GCT中的表达情况，旨在探讨其与GCT的临床特点及患者预后的关系。 　　1　材料与方法 　　1.1标本来源　卵巢GCT组织取自山东医科大学附属医院病理科石蜡包埋的标本，共25份。所有标本均经重新切片，HE染色系统由两位病理科专家复核诊断为GCT，并进行组织学分级。查阅病历获得临床及随访资料。另取山东医科大学附属医院病理科石蜡包埋正常卵巢组织（亦经病理检查证实）标本10份作为对照。 　　1.2　试剂　P53单克隆抗体由美国Dako公司生产，购于福州迈新公司。采用链霉亲合素-生物素过氧化物酶复合物(SABC)染色系统，由博士德生物工程公司提供。 　　1.3　免疫组织化学染色　切片厚度为4μm，贴在玻璃片上，置60℃烤箱内，烘烤2h。常规脱腊、脱水，用磷酸缓冲液(PBS)冲冼后，将标本浸于3％过氧化氢PBS液中5min，灭活内源性过氧化物酶。PBS冼3次。加1：50正常羊血清封闭20min，倒去多余血清，加即用型P53单克隆抗体，置湿盒内4℃过夜。PBS冼3次。加1：100稀释SABC液，37℃下30min。PBS冼3次。DAB显色3～10min，自来水充分冼涤。苏木素复染30s，PBS浸泡至切片变蓝，自来水冼。酒精脱水，二甲苯透明，树胶封片。用已知P53阳性的乳腺癌组织作为阳性对照，用PBS代替第一抗体，作为阴性对照。 　　1.4　结果判定　GCT细胞无棕黄色颗粒为阴性（一），有棕黄色颗粒为阳性。根据染色的强度和范围将阳性分为三级：弱阳性（+），仅能在高倍显微镜下看到，分布范围＜25％瘤细胞，强阳性（+++），着色深，显而易见，分布范围＞50％癌细胞，中度阳性（++），介于（+）和（+++）之间。 　　1.5　统计学分析　因n=25＜40，采用Fisher精确检验。用Kaplan-Meier法计算患者生存率，生存率的比较采用对数秩检验（Log-rank test）。 　　2　结果 　　2.1P53在卵巢层层粒细胞瘤的表达情况 25例卵巢GCT组织中，P53阳性者14例，占56％，其中（+）6例。（++）4例，（+++）4例。棕黄色颗粒主要分布在瘤细胞核上，少部分弥散在胞浆内。10份正常卵巢组织均未见有P53的表达。阳性对照全部为阳性，阴性对照全部为阴性。 　　2.2　P53表达与卵巢粒层细胞瘤临床-病理指标间的关系P53的表达与卵巢GCT临床分期及有无残余瘤有关。P53表达率在Ⅲ～Ⅳ期显著高于Ⅰ～Ⅱ期组，在有残余瘤组明显高于无残余瘤组（均P＜0.05）（见表1）。 表1 P53过度表达与卵巢GCT临床-病理指标间的关系 类别n年龄（yr）临床分期组织分级瘤体大小（cm）有无残余瘤≥50 ＜50Ⅰ～ⅡⅢ～Ⅳ1　2～3≥15 ＜15有 无阳性148　67　74 　108　66　8 阴性115　610　 15 　65　60　11　　2.3　P53与患者预后的关系 全部病例随访均自术后第一天始，到1995年10月31日止，平均随访96个月。除1例失访外，死于本病者11例，死于高血压病者1例，余12例均存活。P53阳性者生存率较阴性者有下降趋势，但统计学分析差异未达到显著水平（P=0.0869）。3　讨论 　　卵巢GCT来源于卵巢性腺间质，多为一种低、中度恶性肿瘤，由于其发病率较低，仅占卵巢恶性肿瘤的6%～10%。给临床上病例收集带来困难。对GCT的遗传学研究较少。Kappes等检测15例卵巢性腺间质肿瘤（其中7例为GCT）的P53突变情况，均表现为野生型P53，无突变，认为这类肿瘤很少涉及P53突变。本研究采用免疫组化技术，发现25例卵巢GCT中有56％为P53为阳性，同多数文献报道卵巢上皮性癌的30％～80％阳性率相近，说明同卵巢上皮性癌一样，P53在卵巢GCT的发生发展中也可能起一定的作用。 　　P53基因是抑癌基因，定位于人染色体17P13.1，编码分子量为53KDa的核磷酸蛋白。正常P53即野生型P53使细胞按正常程序性周期分裂、生长和死亡，防止肿瘤的发生。当P53基因突变后可导致P53基因失活。突变型P53在核内积聚，并表现显性癌基因转化作用。突变型P53的半衰期延长，可用免疫组化法测得。本研究所用的单克隆抗体不能区分突变型和野生型P53，但因