repPCR法在检测产超广谱β内酰胺酶大肠艾希氏菌院内流行中的应用.docVIP

repPCR法在检测产超广谱β内酰胺酶大肠艾希氏菌院内流行中的应用 【关键词】 大肠艾希氏菌 摘要：目的 分析重复序列引物聚合酶链反应(repPCR)的优化条件，并采用本方法分析本院呼吸科病房不同患者痰标本中分离到的产超广谱β内酰胺酶(ESBL)大肠杆菌是否起源于同一菌株。方法 用双纸片确定法测定是否产ESBL；用KB法测定对抗生素的敏感程度；选用肠道菌广泛存在的基因间重复片断为引物进行扩增，并对实验条件进行优化；对产ESBL大肠艾希氏菌进行基因分型分析。结果 建立了repPCR法方法，显示可将大肠艾希氏菌扩增出丰富的区带。分离到的22株产ESBL大肠艾希氏菌分属3个基因型。结论 repPCR法可用于医院院内感染的流行病学调查。 关键词：大肠艾希氏菌；聚合酶链反应；流行病学 Preliminary application of repPCR in epidemiological research of　extended spetrum βlactamase (ESBL)+ Escherichia coli Ma Lieting, Yang Duo, Wang Yawen (Department of Clinical Laboratory, The First Hospital of　Xian Jiaotong University, Xian 710061, China) ABSTRACT: Objective To establish better reaction factors for repPCR and to investigate if the extended spectrum βlactamase (ESBL)+ Escherichia coli isolated from different patients in the respiratory ward have the same origin by using repPCR. Methods The ESBL confirmation was taken by double disc confirmatory test. The susceptibility testing was performed with KB test. By applying the widespread enterobacter repetitive intergenic consensus as a primer, the stains were typed by repPCR following electrophoresis in agarose gel. Results The analysis of the PCR productions indicated that it would create useful DNA banprints and all these 22 ESBL(+)Escherichia coli strains were of three origins. Conclusion The method of repPCR is practical for epidemiological research in nosocomial infection. KEY WORDS: Escherichia coli; polymerase chain reaction; epidemiology 重复序列引物聚合酶链反应(repPCR)是在随机引物PCR(RAPD)基础上发展的对细菌DNA进行指纹图谱分析的一种新方法，它具有快速、经济、简便的优点，在医院感染菌株基因多态性分析中显示了巨大的优势[1,2]，但影响因素很多,需严格优化条件。为此，我们对我院呼吸科分离到的产ESBL大肠艾希氏菌进行repPCR基因分型，以探讨其在医院感染研究中的意义，同时对repPCR进行了优化，以期得出最佳反应条件。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌株 为2003年3月至7月从我院呼吸科病房不同患者痰标本中分离到的22株产ESBL大肠艾希氏菌。 1.1.2 主要仪器和试剂 Taq DNA聚合酶,dNTPs,蛋白酶K，PCR扩增引物，由华美生物工程公司提供与合成；药敏纸片，鉴定纸片及培养基均购自英国Oxoid公司；生物梅里埃公司VITEKTWO鉴定系统,美国PE公司PE5700型PCR扩增仪。 1.2 方法 1.2.1 细菌鉴定 采用生物梅里埃公司VITEKTWO鉴定系统。 1.2.2 ESBL测定 采用双纸片确定法及VITEKTWO鉴定系统认定。 1.2.3 药敏实验 采用KB法，并按NCCLS 2000标准处理和判断结果，并用质控菌ATCC259