口服避孕药对多囊卵巢综合征中GDF9的影响.docVIP

口服避孕药对多囊卵巢综合征中GDF9的影响 作者：郭燕红,甄秀丽,张娜,郭丽娜,吕翠婷,贾 单位：050011 河北省石家庄市第四医院(郭燕红)；河北医科大学第四医院生殖医学科(甄秀丽、张娜、郭丽娜、吕翠婷、贾新转、刘复权) 【关键词】 避孕药，口服；多囊卵巢综合征 多囊卵巢综合征(PCOS)主要合并雄激素增高，临床常用口服避孕药达英35降低雄激素后促排卵，使PCOS患者妊娠。为探讨口服达英35后GDF9在PCOS卵巢表达如何，笔者进行本研究。 1 材料与方法 1.1 实验动物 85 d龄左右雌性SD大鼠55只，随机分成2组，A组35只，B组20只。A组利用Poretsy法制成大鼠PCOS模型，B组为正常对照组。A组随机分为2组，其中C组18只、D组17只。C组口服避孕药达英-35，D组口服安慰剂。 1.2 免疫组织化学采用SP方法 (生物素－链霉卵白素过氧化酶系统)。结果判定：以背景清晰、细胞质着色呈棕黄色为阳性，据阳性颗粒的强度及阳性细胞的比例进行判断，分为－、＋(lt;25%)、＋＋(25%～50%)、＋＋＋(gt;50%) 4个等级。总阳性率为(+、++、+++)之和。 1.3 流式细胞术(FCM)检测条件 采用美国Beckman Coulter公司生产的流式细胞仪EpicsXL Ⅱ型，激发光源为15 mW氩离子激光器，激发波长为488 nm，应用Expo32ADC软件进行免疫荧光数据分析。检测前以flowcheck TMF luorpheres(10 mu;m)荧光微球(REF 6605359 Coulter, Inc. Fullerton, CA 92835)作为标准样品调整仪器CV值在2%以内。GDF9的FCM定量分析：蛋白的相对含量以Xmode均值荧光强度表示，公式为：lg(Xmode)times;340=线性值均值。 1.4 统计学分析 应用SPSS 11.5统计软件进行统计学分析。计量资料以plusmn;s表示，组间比较采用t检验。计数资料采用chi;2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 GDF9在颗粒细胞和卵泡膜细胞中的表达 GDF9在A组颗粒细胞表达低于B组(Plt;0.05)。GDF9在A组卵泡膜细胞表达高于B组(Plt;0.05)。见表1。 2.2 GDF9在卵巢中的表达 GDF9在A组表达量为15plusmn;10，明显低于B组的46plusmn;24(P＜0.01)。 2.3 口服避孕药达英35后GDF9在颗粒细胞和卵泡膜细胞中的表达 A组GDF9在卵泡膜细胞表达低于B组卵泡膜细胞表达(Plt;0.05)，在颗粒细胞表达与B组比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)。见表2。表1 2组GDF9在颗粒细胞和卵泡膜细胞中的表达例注：与B组比较，P＜0.05表2 2组用药后GDF9在核粒细胞和卵泡膜细胞的表达注：与D组比较，P＜0.05 3 讨论 作为主要由卵巢分泌的细胞因子，GDF9对卵母细胞的生长、有丝分裂，颗粒细胞的增殖及卵泡膜层的形成，对雌、孕、雄激素的合成具有重要作用，与FSH协同刺激卵泡的生长，故其在卵泡发育，尤其是较早期卵泡发育过程中所起的作用是必不可少的。在对人的卵泡培养中，GDF9能更明显地促进卵泡膜细胞的增生，卵泡膜细胞对GDF9比较敏感，表明其可能是GDF9的原始靶点［1］。故缺失GDF9可导致卵泡膜形成缺陷。 Teixeira等［2］采用原位杂交方法研究，表明正常女性GDF9 mRNA从卵泡募集之初的始基卵泡卵母细胞开始表达，随着卵泡的发育稳步增高，至排卵前卵泡的卵母细胞维持较高水平，而PCOS、多囊卵巢(PCO)的妇女卵巢中GDF9 mRNA表达却直到初级/次级卵泡转化阶段才出现，并均低于正常女性同期阶段的卵母细胞GDF9 mRNA的表达水平，表明在PCOS、PCO女性卵母细胞生长及分化阶段GDF9 mRNA表达被推迟或减少，故认为卵母细胞GDF9 mRNA表达调节障碍可能促使PCOS、PCO女性卵泡发生异常。 在人的增殖期颗粒细胞和卵泡膜细胞，GDF9通过阻断StAR、P450scc及P450芳香化酶mRNA的cAMP依赖性表达而抑制类固醇产生，减少孕激素合成。含有GDF9的人卵泡膜细胞能阻断Forskolin刺激的孕激素、17alpha;羟孕酮和脱氢表雄酮的合成。表明GDF9在卵泡类固醇生成，特别是卵泡膜细胞功能方面具有调节作用［1］。 本实验免疫组化发现，GDF9在A组卵泡膜细胞表达高于B组(P＜0.05)，卵泡膜细胞合成的雄激素透过基膜进入颗粒细胞，在芳香化酶系的作用下雄激素转变为雌激素。在PCOS卵巢中，卵泡膜细胞增生，颗粒细胞数量减少伴其功能不