试验四SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质.PPT

实验四 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 (1) 学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理。 (2) 掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳的操作技术。 实验原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载体的一种区带电泳。该凝胶由丙烯酰胺（Acr）和交联剂N，N—甲叉双丙烯聚酰胺（Bis）聚合而成。利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。 Acr和Bis单独存在或混合在一起时是稳定的，但在具有自由基团体系时就能聚合。引发自由基团的方法有化学法和光化学法两种。化学法的引发剂是过硫酸胺（Ap），催化剂是四甲基乙二胺（TEMED）；光化学法是以光敏感物核黄素来代替过硫酸胺，在紫外光照射下引发自由基团。 采用不同浓度的Acr、Bis 、Ap、TEMED使之聚合，产生不同孔径的凝胶。因此可按分离物质的大小，形状来选择凝胶浓度。 在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白质的迁移率取决 于它所带的净电荷的多少、分子的大小和形状。 如果用还原剂（如巯基乙醇或二硫苏糖醇等）和十二烷基 硫酸钠（缩写SDS）加热处理蛋白质样品，蛋白质分 子中的二硫键将被还原，并且1g蛋白质可定量结合 1.4g SDS，亚基的构象呈长椭圆棒状。由于与蛋白质 结合的SDS呈解离状态，使蛋白质亚基带上大量负电 荷，其数值大大超过蛋白质原有的电荷密度