复合生物酶对铜绿假单胞菌生物膜的清除及对头孢他啶敏感性的增效作用_Image_Marked.pdfVIP

复合生物酶对铜绿锻荜施菌生物膜的清除投对头孢他啶敏感性酌增效作用 中文摘要 鹜蒹走萋证据表明，铜绿假单胞菌引起酌生物貘(biofilm，BF礴日关 感染是临床常见的难治性感染。生物膜细茵对抗茵药物的抵抗力增 加，又不棼被氟舔内盼抗体溶解和巨嚷细胞吞噬，建造成持续感染的 主要原因。因此，寻求细菌生物膜的防治对策非常必要。由于生物膜 lular 是奄微生耱细胞和跑玲多聚物(extracel polymeric 蛋囊质争勰类““。在醛基震审，通过各对EPS漓镌相互作|}{l保穗掰 结构的完整性。一旦EPS分子链发生改变，BF的结构随之改变，甚 至破坏。鼹比采用根除或渗透入跑外多聚物戆治疗方法可有效手予委生 物膜。 第一部分 常见生物酶及复合生物酶对钢绿慑单胞茸生物膜螅清除 目的本研究检测临床常用生物酶对钢绿假单胞菌生物膜(72h)的清 除作用。同时，将两种作用底物不同的生物酶联合使用，以观察其是 否能够提高对生物膜的清除效果。 方法采用微量平板法建立成熟铜绿假单胞菌BF，观察各种生物酶和 复合生物酶对BF的清除作用。还采用Robbins装置连续培养铜绿假 单胞菌薛，观察复合生物酶对BF的清除效果与BF培养时间之闽的 关系。 结鬃有些生物酶如菠萝蛋白酶、链遭酶、糜蛋白酶等对铜绿假单胞 茵生物膜有不同程度的清除，而另一蟪酶如1，3一p一葡聚糖酶则没 有清狳作髑。链蓬酶争纛蛋白酶渡一定比穰(链道酶5000u／ml和糜 蛋由酶4000u／m1)联合使用将提高酶对生物膜的清除效果，复合生 物酶楚理麓君生渤膜内活菌数减少量速一令数量级。莠外，复合生物 酶不具有杀菌活性，且复合生物酶中备种酶之间不存在拮抗作用。复 合童耱酶对培养48h以癌的生物摸清除率这90％EL上，而对72魏生物 膜的清除率明显下降，复合生物酶对BF的清除效果随着BF培养时间 的延长磊芩断减弱。 结论含酯键和酰胺键的餐白质和DNA是铜绿假单胞茵BF的结构成 分，为薛结均成分研究提供一理论撂索。采用复合生物酶方法处理 复台生锈瓣对铜绿骰单腱菌生物膜的清际敷对头孢觎啶敏感性的增效作璃 铜绿假单脆菌生物膜的EPS，被证明是清除BF的有用技术，为研究 BF的干预治疗提供新的思路和依据。 关键词： 擞物酶；链道酶；糜蛋白酶；生物膜；铜绿假单胞茵 第二部分 复合杰物酶蹿头孢诬啶敏感褴砖潜效谗簏 目的将复合生耱酶的发耪膜清除作躅与头孢魉啶砖杀麓活矬翱结 合，以期踅有效地清除趺物膜，杀灭生物膜内的铜绿假单胞菌。 方法在舔外建立赡针对生物黢秘抗麓药物敏感性试验孛，评结滓游 和生物膜铜绿假单胞菌对头孢他啶和复合生物酶一头孢他啶敏感性 试验鲢结暴。另外，采耀连续培养装燕(改良Robbins装鬣)建立生 物膜，首次模拟l祷床给药方案，在头孢他啶连续作用24h的基础上， 每阙礴强给予复合生物酶，每次作残3h，以观察复合生物酶对头孢 他啶的增效作用。 结果研究显示，无论粘液型还是非粘液型锏绿假单胞菌，头孢他啶 对斑物膜菌的MIC值和MBC值均明显高于浮游茵，药物浓度增加2个 稀释度以上。对于大部分铜绿假单胞茵(粘液型和非粘液型)，复合 生物酶一头孢他啶可明漫降低嫩物膜细菌的MIC值，使生物膜细菌与 浮游茵的MIC值相似。而生物膜菌hlBC值的降低不如MIC值明显。对 于研究中所用的铜绿假单胞菌粘液袜M5务替藉液袜NM3，使用头孢 他啶与使用头孢他啶一复合生物酶相比较，BF茵的MIc值和MBC值 均无差另《，复合臻物酶对关孢他嚏没有增效作届。另外，对于浮游菌 来说，复合生物酶对其的MIC值和MBC值均没有影响。与对照组相比 较，头藐稻啶23|l g／ml连续襞热24h对的铜绿假单施菌童耱膜(48h) 的清除作用并不明显，而在连续使用头孢他啶的同时间隔加入复合生 物酶，可明显增强头孢纯啶对48h生物膜肉垂噻蓉的杀菌作躅。经过 24h，硅胶片上细菌数蚤为10CFU／胶片，且诀孢他啶作用4h时，硅 获片主生物膜莺数量即有一拿簸量级秘变纯。 结论辅助使用复合生物酶可以增加部分铜绿假单胞菌对头孢他啶的 敏感挂，势渗泰防治生物蹊疾病提挟了耨妁思路和方法。 美键词复合生物酶；生物膜；头孢纯啶；药敏