生化工程下游技术 知识课件第十二章色谱分离.pptVIP

第十二章色谱分离;特点： （1） 纯化倍数高 （2） 操作规模小，放大困难 （3）?终产品纯化 （4） 适用于价格昂贵的产品 ; 色谱分离包括一个流动相（气相或液相）和一个固定相，分离的基础是组分的差速迁移。在色谱柱中流动相沿固定相流动，混合物中各组分在此固定相与流动相间的分配不同，在固定相中相对量多的组分，与固定相在一起的时间分率大，随流动相一起流动的速度就慢。这样，由于混合物中各组分被固定相滞留的程度不同，它们随流动相移动的速度就不同（称为差速迁移），随流动相移动快的组分先离开色谱柱，随流动相移动慢的组分后离开色谱柱，因而可使混合物的各组分互相分离。; 1、根据分离机理分类 吸附色谱 依靠对固体的吸附作用。 分配色谱 依靠溶质在液液两相的溶解分配 离子交换色谱 依靠离子交换作用 位阻排斥色谱 依靠多孔固体或凝胶的排斥效应 亲和色谱 依靠生物分子的专一性结合 ;Stationary;载 体;■ 选择离子交換介質;■亲和层析法四項要素;■ 亲和层析法的作用机理：;Ni;2、按固定相形状不同分类 柱色谱 分离体系采用圆柱管 空柱色谱 色谱柱是空心——无阻碍的中心通道形色谱 纸上色谱 固定相是滤纸或将固定相载于纸上 薄层色谱 固定相是一层吸附剂物料，平铺于惰性平板上; 3、按流动相和固定相分类 气相色谱 流动相是气体 液相色谱 流动相是液体 超临界色谱 流动相是超临界流体 4、按色谱操作分类 迎头或前沿色谱 以阶梯进料的形式操作 冲洗色谱 连续加入冲洗剂，脉冲进料; 置换色谱 在前沿色谱的基础上，用吸附能力最强的组分置换 程序升温色谱 床层温度升高，吸附等温线的斜率减小，有规则的升高色谱柱的温度，有利于吸附力强的组分脱附 阶梯淋洗色谱 用不同离子强度(如pH值或盐浓度等)的溶液有规律地冲洗床层，使性质接近的离子或组分得以分离。 5、根据操作压力的不同分类 低压色谱 0.5MPa 中压色谱 0.5? 5MPa 高压色谱 5? 50MPa; 第二节 生物工业中的色谱分离 一、色谱分离的规模 色谱分析：10mg 半制备（中等规模制备）：10-50mg 制备（样品制备）：0.1-1g 工业生产：20g/d;二、色谱分离方法的选择 选择不同的色谱分离方法的依据： 1）目的产物的分子结构、物理化学特性及分子量的大小。 2）主要杂质，特别是分子结构、大小和理化特性与目的产物相接近的杂质的成分与含量。 3）目的产物在色谱分离过程中生理活性的稳定性。;三、分析色谱与制备色谱和工业色谱的比较 1）应用色谱技术范围的不同 2）操作上的不同 3）色谱分离理论上的不同 ? 理论塔板数的不同 2 分配系数的不同 3 样品保留值与峰高的不同; 第四节 色谱分离的基本原理 在色谱操作中，加入洗脱剂而使各组分分层的操作称为展开 洗脱时从柱中流出的溶液称为洗脱液 展开后各组分的分布情况称为色谱;(一)分配系数 在一定条件下，一定量的溶质在两种互不相溶的溶剂中达到平衡时，溶质在两种中的浓度之比为一常数，此常数称为分配系数。 (二)阻滞因数 溶质在色谱柱(纸、板)中的移动速率与流动相移动速率之比称为阻滞因数，以Rf表示，因而也称为Rf值。 Rf=1，溶质不溶于固定相 Rf=0，溶质不溶于流动相 0Rf1， Rf越大，溶质随流动相流动的速度越快 (三)塔板理论 同化工原理中的蒸馏操作一样，色谱柱的分离效率也可用塔板理论来描述。;;二、吸附色谱 吸附现象是表面的一个重要性质之一。固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分于所受的吸引力不相等。表面层所受的作用力小，因而溶质分子在流动过程中碰到固体表面时受到表面剩余力的影响，被吸附而停留下来。; 吸附色谱可分为无机基质吸附色谱(多种作用力)、疏水作用吸附色谱(疏水作用)、共价作用吸附色谱(共价键)、金属整合作用吸附色谱(整合作用)、聚既胺吸附色谱(氢键作用)等。此外，离子交换色谱和亲和色谱也可归类于吸附色谱，;三、凝胶色谱分离 凝胶色谱分离具有许多特点： (1)凝胶为不带电荷的惰性物质，不与溶质分子发生任何作用，因此分离条件温和，蛋白质收率高，重现性好；