生物合成ytw.pptx

;DNA在复制时，以亲代DNA的每一股作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一股亲代DNA链，这种现象称为DNA的半保留复制(semi-conservative replication)。 ; ;DNA以半保留方式进行复制，是在1958年由M. Meselson 和 F. Stahl 所完成的实验所证明。 该实验首先将大肠杆菌在含15N的培养基中培养约十五代，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。然后将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作密度梯度离心，将具有不同密度的DNA分离开。;DNA半保留复制研究实验结果示意图;1） 底物(substrate) 2） 模板(template) 3） 引发体和RNA引物 4） 各种酶系 5) 单链DNA结合蛋白 ;DNA复制过程中脱氧核糖核苷酸的聚合反应;DNA复制是模板依赖性的，必须要以亲代DNA链作为模板。亲代DNA的两股链解开后，可分别作为模板进行复制。 ;;;4) DNA复制的酶类; DNA聚合酶;;在原核生物中，目前发现的DNA聚合酶有三种，分别命名为DNA聚合酶Ⅰ（pol Ⅰ），DNA聚合酶Ⅱ（pol Ⅱ），DNA聚合酶Ⅲ（pol Ⅲ），这三种酶都属于具有多种酶活性的多功能酶。 参与DNA复制的主要是pol Ⅲ和pol Ⅰ。;pol Ⅲ由十种亚基组成不对称异源二聚体结构，其中?亚基具有5→3聚合DNA的酶活性，具有复制DNA的功能；而?亚基具有3→5外切酶的活性，与DNA复制的校正功能有关。 ;大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能; 原核生物三种DNA聚合酶比较?;真核生物五种DNA聚合酶;真核生物的DNA聚合酶;DNA连接酶(DNA ligase)可催化两段DNA片段之间磷酸二酯键的形成，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。 ; DNA连接酶催化的条件： ① 需一段DNA片段具有3’-OH，而另一段DNA片段具有5’-Pi基； ② 未封闭的缺口位于双链DNA中，即其中有一条链是完整的； ③ 需要消耗能量，在原核生物中由NAD+供能，在真核生物中由ATP供能。 ;解螺旋酶，又称解链酶或rep蛋白，是用于解开DNA双链的酶蛋白。 每解开一对碱基，需消耗2分子ATP。;DNA拓扑异构酶(DNA topoisomerase);;解链过程中正超螺旋的形成;拓扑异构酶的作用特点： 既能水解、又能连接磷酸二酯键;单链DNA结合蛋白（single strand binding protein, SSB），又称螺旋反稳蛋白(HDP)，是一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。 使解开双螺旋后的DNA单链能够稳定存在，即稳定单链DNA，便于其作为模板复制子代DNA；保护单链DNA，避免核酸酶的降解。;DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点(origin) 。 在原核生物中，复制起始点通常为一个，而在真核生物中则为多个。;细菌和酵母菌中DNA复制起始点的碱基序列;大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列;习惯上把两个相邻DNA复制起始点之间的距离（或DNA片段）定为一个复制子(replicon) 。 复制子是独立完成复制的功能单位。 DNA复制时，局部双螺旋解开形成两条单链，这种叉状结构称为复制叉。;;复制起始点、复制子与复制叉（动画演示）;DNA复制时，以复制起始点(origin)为中心，向两个方向进行解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 但在低等生物中，也可进行单向复制（如滚环复制）。;DNA的双向和单向复制;;参与DNA复制的DNA聚合酶，必须以一段具有3’端自由羟基（3’-OH）的RNA作为引物(primer) ，才能开始聚合子代DNA链。 RNA引物的大小，在原核生物中通常为50～100个核苷酸，而在真核生物中约为10个核苷酸。RNA引物的碱基顺序，与其模板DNA的碱基顺序相配对。 ;DNA聚合酶只能以5→3方向聚合子代DNA链，即模板DNA链的方向必须是3→5。 由于DNA分子中两条链的走向相反，因此当分别以两条亲代DNA链作为模板聚合子代DNA链时，子代链的聚合方向也是不同的。;;以3’→5’方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是连续进行的，其子代链的聚合方向为5’→3’，这一条链被称为领头链(leading strand)。 以5’→3’方向的亲代DNA链为模板的子代链在复制时则是不连续的，其链的聚合方向也是5’→3’，这条链被称为随从链(lagging strand)。 领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 ;由于亲代DNA双链在复制时是逐步解开的，因此，随从链的合成也是一段一