第4章 节 体内药物分析方法的建立与验证 体内药物分析课件,药物分析研究生复试用.重点已标红.pptVIP

第四章 体内药物分析方法的建立与验证 ;本章内容提要;待测药物与生物介质 体内分析的目的 实验室的设备条件;待测药物与生物介质;一、待测药物的理化性质及体内存在状况;三、生物样品的类型与样品制备方法;四、实验室条件;第二节 分析方法建立的一般步骤;一、分析方法的选择;分析方法;;二、分析方法的建立;二、分析方法的建立; 取被测组分（药物或代谢产物）、内标物质的标准物质（对照品、标准品或符合标准的原料药）进行试验。 确定最佳检测条件和检测灵敏度（响应值） 色谱条件的确定 ;空白溶剂试验 以水代替生物基质，预处理样品 初步确定合适的预处理条件、考察溶剂的干扰情况、初步了解萃取回收率 空白生物基质试验 采用空白生物基质试验 考察生物基质对测定的干扰（方法专属性） 模拟生物样品试验 待测物加入到空白生物基质中试验 进一步考察生物基质对测定的干扰（方法专属性），确定最佳预处理条件，初步了解生物样品中可测定的最低浓度、方法的准确度、精密度、准确度，药物萃取回收率等。 实际生物样品的测试 预处理方法的最终建立。;第三节 分析方法验证的内容与要求;一、方法特异性(专属性或选择性);考察一个分析方法是否具有特异性，应着重考虑以下几点： 1内源性物质的干扰 2代谢产物的干扰 3伍用药物的干扰 4与参比方法的相关性;1 内源性物质的干扰;2 代谢产物的干扰;3 伍用药物的干扰;4 与参比方法的相关性;结果比较：Y＝a＋bX 相关系数(r) —— 表示两种方法测得结果的相关性，即呈比例变化的程度，而比例值即为回归方程的斜率b。 在截距a很小的前提下，若斜率b越趋近于1，则待考察方法越等同于参比方法。;二、标准曲线与线性范围;;标准曲线的制备 将药物对照品（溶液）加入与待测样品相同的空白生物基质中混匀，配成已知药浓的标准样品，然后同待测样品一同按相同方法预处理后测定，将分析得到的响应值，对药浓建立标准曲线。 1 加入空白基质的原因： 　使标准样品与待测样品均处于相同的生物基质环境中。 2 按相同方法预处理的原因 待测样品中的组分与标准样品中的组分以相同比例表现为响应值 　3 标准样品中的浓度以单位生物基质中加入对照品量计算，因此药浓为总浓度。　;标准系列溶液(非生物基质溶液)的制备 内标溶液的制备 标准系列模拟生物样品（标准样品）的制备 标准曲线的绘制 回归方法：加权最小二乘法 ;（1）标准系列溶液(非生物基质溶液)的制备;;（2）内标溶液的制备;（3） 标准样品的制备;（4）标准曲线的绘制;标准曲线药物浓度表示 以单位体积（质量）生物基质中加入标准物质的量表示。 如：空白血浆0.5ml，加入标准溶液（100ug/ml）10ul（或还有其他溶液） ， 浓度为：2ug/ml。 组织可用ug/g，根据所取匀浆体积所相当的组织重量中加入标准物质的量计算。;（5）加权最小二乘法;（5）加权最小二乘法;（5）加权最小二乘法;2. 标准曲线的限度要求;; 标准曲线 样品测定 空白生物基质 真实样品 +系列浓度对照溶液 +同体积空白溶剂 +内标溶液 +同体积内标溶液 预处理 相同预处理 测定 测定 ;;（三）定量下限（LLOQ）;（四）精密度与准确度;批内(within-run或intra-assay)RSD 　日内(within-day) RSD 　 　在同一分析批（同一日）内的测定结果之间的RSD 批间(between-run或inter-assay)RSD 　日间(between-day，day-to-day) RSD 　 　不同分析批的测定结果之间的RSD 分析批：包括测定样品、适当数目的标准样品和质控样品的完整系列，相同实验条件和时间区段。 　一天内可完成几个分析批，一个分析批也可持续几天完成。通常一天完成一个分析批。 ;精密度（precision）;测定方法： 取空白生物基质（如血浆）数份，照标准曲线项下方法操作，在标准曲线范围内制备至少高(接近上限)、中、低(接近LOQ) 3个浓度的质控(quality control，QC)样品，每一浓度至少5个样品。与随行的标准曲线同法测定（每个样品分析测定1次 ）计算。;准确度;精密度（precision）;限度要求 ;含义：包括方法稳定性和样品稳定性 考察内容： 　　含药生