急性早幼粒细胞白血病干细胞的分离 鉴定及体内生物学行为研究-isolation, identification and biological behavior of acute promyelocytic leukemia stem cells in vivo.docx

急性早幼粒细胞白血病干细胞的分离、鉴定及体内生物学行为研究摘要本研究论文以hMRP8-hPML-RARα转基因小鼠作为研究急性早幼粒细胞白血病（APL,acutepromyelocyticleukemia）的模型，分离并鉴定了该模型的白血病干细胞(LSCs,Leukemiastemcells)，同时发现LSC在分化过程中其致白血病能力（LIA,leukemia-initiatingability）并不立即丧失，进一步在体内短期应用全反式维甲酸（ATRA,all-transretinoicacid）可以促进LSCs分化，但经ATRA诱导产生的分化中的APL细胞仍具有很强的LIA。通过以上研究，对于我们进一步深入认识肿瘤干细胞的生物学功能以及靶向治疗药物对肿瘤干细胞的作用将有很大帮助。传统的肿瘤干细胞理论认为肿瘤组织内只有肿瘤干细胞具有产生肿瘤的能力[1,2]，然而近年来多项研究提示肿瘤组织内部存在多群具有产生肿瘤能力的细胞[3,4,5]，然而这些细胞的致病力、以及相互之间的关系并不明了。我们通过对hMRP8-hPML-RARα转基因小鼠模型的表型分析发现，在APL发病小鼠体内主要出现一群表型上类似于粒系或单核系祖细胞的异常群体，进一步的分析发现在APL发病小鼠体内存在多群处于不同分化阶段的表达PML-RARαmRNA的细胞，通过对多种表面标志物的分析我们最终找到了c-Kit+Mac-1+/-AA4.1++这一高度富集LSCs的细胞群体，并且能够在体内连续移植三代，同时能在体内产生不同分化阶段的APL细胞。然而有趣的是随着LSCs的分化其LIA并不立即丧失，处于部分分化中的APL细胞仍具有很强的LIA，直至分化到终末阶段其致白血病能力才明显丧失。通过以上试验我们证实在APL转基因小鼠模型中存在一群具很强LIAAPLLSCs,能够在体内长期自我更新，同时我们发现除了鉴定出的APLLSCs外，由APLLSCs分化而来的处于部分分化阶段的APL细胞仍具有较强的LIA，以上结果和之前报道的研究提示具有LIA能力的细胞不一定只局限于干细胞阶段，以上研究进一步加深了我们对白血病干细胞的认识。上世纪80年代，ATRA诱导分化疗法的出现大大改善了APL患者的疗效。那么究竟ATRA对APLLSCs能产生什么样的作用呢？我们通过进一步对APL小鼠进行短期ATRA处理，发现ATRA加速了LSCs的分化，导致分化中的APL细胞及终末分化的APL细胞增加，然而ATRA对APL总体LIA的影响并不明显。通过进一步的分析我们发现ATRA能明显的诱导APLLSCs分化，诱导产生的部分分化的APL细胞在细胞形态、免疫表型、基因表达上与APL干细胞有明显的差异，但部分分化的APL细胞仍具有很强的LIA，尽管经ATRA诱导产生的终末分化的APL细胞LIA明显减弱。进一步我们发现分化中的APL细胞可能是通过去分化这一过程回复到APLLSCs，且产生的APL干细胞与未经ATRA处理的APL干细胞在形态、免疫表型上具有相同的特征。以上的结果提示ATRA加速诱导APLLSCs的分化，使分化中的以及终末分化的APL细胞增加，然而处在分化中的APL细胞可以通过去分化为干细胞这样一个机制导致LSCs的重建，进而导致肿瘤复发。以上结果说明ATRA能够诱导APLLSCs分化，然而如果APLLSCs仅被诱导到部分分化的阶段，这部分细胞仍具有很强的LIA,只有诱导到终末分化的阶段才会明显的丧失LIA。关键词：hPML-RARα转基因小鼠，急性早幼粒细胞白血病，白血病干细胞(LSCs,Leukemiastemcells)，致白血病能力（LIA,Leukemia-initiatingability）全反式维甲酸（ATRA,all-transretinoicacid）,部分分化的APL细胞Theisolationandidentificationofleukemia-initiatingcellsinaacutepromyelocyticleukemiamousemodelanditsinvivobiologicalbehaviorstudiesAbstractBasingonahMRP8-hPML-RARαtransgenicmice(TM)model,Weisolateandidentifytheleukemiastemcells(LSC)ofAPL.Meanwhile,wefindthattheleukemia-initiatingability(LIA)ofLSCsdoesn’timmediatelylosealongwithdifferentiation.Short-termall-transretinoicacid(ATRA)canpromotethedifferentiationo