急慢性应激对小鼠空间学习记忆功能的影响及脑内nt-3的作用-effects of acute and chronic stress on spatial learning and memory function in mice and the role of nt - 3 in brain.docx

曲阜师范大学研究生学位论文原创性说明（根据学位论文类型相应地在“□”划“√”）本人郑重声明：此处所提交的博士□/硕士□论文《急慢性应激对小鼠空 间学习记忆功能的影响及脑内NT-3的作用》，是本人在导师指导下，在曲阜 师范大学攻读博士□/硕士□学位期间独立进行研究工作所取得的成果。论文 中除注明部分外不包含他人已经发表或撰写的研究成果。对本文的研究工作 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中已明确的方式注明。本声明的法律 结果将完全由本人承担。作者签名：日期：曲阜师范大学研究生学位论文使用授权书（根据学位论文类型相应地在“□”划“√”）《急慢性应激对小鼠空间学习记忆功能的影响及脑内NT-3的作用》系本 人在曲阜师范大学攻读博士□/硕士□学位期间，在导师指导下完成的博士□/硕士□学位论文。本论文的研究成果归曲阜师范大学所有，本论文的研究内 容不得以其他单位的名义发表。本人完全了解曲阜师范大学关于保存、使用 学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门送交论文的复印件和电子版本， 允许论文被查阅和借阅。本人授权曲阜师范大学，可以采用影印或其他复制 手段保存论文，可以公开发表论文的全部或部分内容。作者签名：日期：导师签名：日期：摘要本研究采用单一足底电击方式（电压 36V，每次持续 30s，间隔 15s 每次，共 30 次） 建立急性应激动物模型；以 7 种应激方式（通宵照明、足底电击、禁食、冷水游泳、拥挤、 高台、禁水，每天随机选用 1 种，21 天）给予小鼠，逐步建立慢性应激动物模型。探究不 同月龄小鼠在急性应激和慢性应激作用后自发行为的改变和空间学习记忆功能及相关脑 区神经营养因子-3（NT-3）的变化。检测方法：小鼠于新异环境中的探究活动及适应能力 以旷场实验观测；空间学习记忆能力采用 Morris 水迷宫试验方法检测；小鼠海马及前额叶 皮层区，神经元形态学的变化和 NT-3 的表达分别以 HE 染色方法和免疫组织化学法检测。 研究结果：1. 青年应激组小鼠在急性应激后即刻，与青年对照组比较，直立活动次数和爬行格数 表现为显著性增加，粪便颗粒数减少和中央格停留时间缩短且变化显著，而修饰次数的变 化不显著；急性应激停止后一周，各组青年小鼠的各项行为指标均无显著差异。老年应激 组小鼠在急性应激后即刻及应激停止后一周，其旷场行为的变化趋势与青年应激组小鼠一 致。老年对照组小鼠的直立次数显著少于青年对照组。2. 在定位航行实验中，青年和老年应激组小鼠在急性应激后即刻，与各自对照组小鼠 比较，逃避潜伏期均明显缩短；两年龄组小鼠比较，老年小鼠其对照组及应激组的逃避潜 伏期显著性延长。急性应激停止后一周，比较对照组与应激组，没有显著性差异。青年和老年应激组小鼠在空间搜索试验中，急性应激后即刻与各自对照组小鼠比较， 在第一象限（即平台象限）的游泳停留时间均显著延长。青年与老年两对照组小鼠相比没 有显著差异。应激组小鼠和对照组小鼠在应激停止后一周，没有显著差异。3. 青年和老年应激组小鼠与各自对照组比较，在急性应激即刻与应激停止后一周，神 经元形态结构均未发生显著性改变。应激组小鼠在急性应激后即刻，其海马和前额叶皮层 NT-3 表达明显增强，阳性细胞 数显著性增加，平均目标灰度值明显降低；NT-3 的表达变化在青年应激组小鼠中更为显著。 在应激停止后一周，NT-3 的表达差异不显著。老年对照组 NT-3 的表达显著低于青年对照 组，老年应激组 NT-3 的表达明显少于青年应激组。4. 青年应激组在慢性应激后即刻，与对照组小鼠比较，表现为爬行格数、直立活动及 修饰次数显著性减少，粪便颗粒数增加和中央格停留时间增加且变化显著；青年应激组在 应激停止后一周，爬行格数、直立活动及修饰次数的减少仍显著。在应激后即刻及应激停 止后一周，老年组小鼠的旷场行为变化趋势与青年组小鼠是一致的，且变化更显著。老年对照组小鼠的直立次数及修饰次数显著低于青年对照组小鼠。I5. 在定位航行试验中，青年和老年小鼠在慢性应激后即刻与应激停止后一周，应激组小鼠的逃避潜伏期显著高于对照组小鼠；老年组小鼠较青年组小鼠的逃避潜伏期明显延 长。在空间搜索试验中，青年和老年小鼠在慢性应激后即刻，比较在第一象限（即平台象 限）的游泳停留时间，应激组与各自对照组比较均缩短且变化明显。青年与老年两对照组 比较差异不明显。6. 慢性应激后，应激组小鼠表现为在海马及前额叶皮层中，神经元数量减少，呈散乱 排列，多数细胞着色较浅，染色不均匀，有的细胞萎缩变形。青、老年对照组比较，老年 各脑区神经元分布略为稀松，但细胞的结构完整且排列规整。老年应激组小鼠的神经元损 伤情况比青年应激组小鼠更加严重，在应激停止后一周后损伤仍无明显恢复。慢性应激后，应激组小鼠海马及前额叶皮层表现 NT-3 阳性细胞数量降低显著，