脊尾白虾全人工繁育及繁殖相关基因的分析-analysis of genes related to total artificial breeding and reproduction of brachionus carinicauda.docx

脊尾白虾全人工繁育及繁殖相关基因的研究摘要本研究首次解决了脊尾白虾全人工繁育技术，提出了人工控制亲虾同步性成熟的方法，以及受精卵人工孵化及幼体选优的方法，明确了幼体孵化、培育的适宜温度和盐度范围。同时借助分子生物学手段，克隆了脊尾白虾卵黄蛋白原(Vg)、卵黄蛋白原受体(VgR)和蜕皮激素受体(EcR)基因，并分析了Vg、VgR和EcR基因在脊尾白虾繁殖过程中的表达特征。主要结果如下：一、脊尾白虾亲虾人工培育1、脊尾白虾卵巢解剖结构与组织学特征取卵巢发育不同阶段的脊尾白虾雌虾卵巢，研究了卵巢结构、组织学特征以及卵黄蛋白积累。结果显示，脊尾白虾卵巢一对，左右对称，中间分离，前后端愈合，成熟的卵巢外形呈“⊥”型或“橄榄球”型。随着卵巢发育，性腺指数逐渐增大，卵巢成熟时(IV期)最大，排卵后(V期)又降到最小；组织学特征显示，在卵细胞增殖期，细胞核清晰可见，一般能观察到1-2个沿核膜内侧分布的核仁，同时随着卵细胞逐渐成熟，卵原细胞周围的滤泡细胞逐渐增多，卵原细胞的卵黄蛋白逐渐增多。卵细胞成熟时，并未观察到类似对虾的皮质棒，明显的标志是细胞核消失，滤泡细胞数量减少。排卵后的恢复期，细胞核重新出现，卵原细胞又开始增殖，卵黄蛋白重新开始积累。2、脊尾白虾亲虾人工培育及其同步性成熟调控方法的建立提出了一种全人工培育脊尾白虾亲虾的方法，在24°C、26°C温度下，分别经过120天和110天的培育，80%雌虾性腺可达到成熟。此方法可切断其病原传播途径，在人工控制的养殖环境下实现脊尾白虾性腺同步发育成熟，为培育出健康优质脊尾白虾苗种打下良好的基础。二、脊尾白虾受精卵人工孵化1、不同温度和盐度对脊尾白虾胚胎发育速度的影响选用实验室内人工控制交尾的脊尾白虾，研究了不同温度和盐度对脊尾白虾胚胎发育的影响。结果显示，5-30盐度范围内，盐度20时的孵化时间最短，但与5、10、15、25、30盐度组无显著差异(P0.05)。脊尾白虾胚胎发育的生物学零度为12.18°C，有效积温为3828.27°C?h。在15-28°C范围内，温度对脊尾白虾胚胎发育影响显著，胚胎发育时间随着温度升高而呈双曲线性缩短，而胚胎发育速度随着温度的升高而呈直线性加快，但当温度超过30°C时，胚胎无法正常完成发育。因此在脊尾白虾育苗中，幼体孵化温度不应低于12°C，最高不超过28°C，盐度控制在5-30范围内即可。2、脊尾白虾受精卵人工孵化及幼体选优方法的建立提出了一种脊尾白虾人工室内孵化及幼体选优的方法。主要包括以下特点：通过调节水温，可调控受精卵发育速度；可以将活力强幼体与活力差幼体、死亡幼体很好地分离，幼体变态为仔虾的存活率在85%以上；每尾抱卵虾单独培育，幼体孵化后亲缘关系明确，可用于家系建立及选择育种。三、脊尾白虾幼体人工培育1、不同温度对脊尾白虾幼体变态存活的影响选用实验室内人工控制交尾的脊尾白虾，研究了不同温度对脊尾白幼体变态、存活的影响。结果显示，在盐度为31的条件下，脊尾白虾幼体变态发育速度随着温度的升高而加快，18°C、20°C、22°C、24°C、26°C和28°C各实验组开始出现仔虾的时间依次为17、14、11、9、8和8d，各组90%以上幼体变态为仔虾的时间依次为21、18、15、14、11和11d。各实验组在幼体变态过程中存活率都呈明显的阶梯式下降趋势，且28°C组的存活率下降最快，但当存活幼体全部变为仔虾时，各实验组间的存活率并无显著性差异(P0.05)。18°C组仔虾干质量明显高于其它各组(P0.05)，28°C组仔虾干质量最低，但与20°C、22°C、24°C和26°C组无显著性差异(P0.05)。因此在脊尾白虾育苗中，幼体培育温度，建议控制在22-26°C为最佳。2、不同盐度对不同日龄脊尾白虾生长发育的影响选用室内人工培养的卵巢发育到II期的脊尾白虾雌虾以及性成熟雄虾，经逐级淡化，盐度稳定在5、10、15、20、25、30。雌抱卵孵化后，研究了不同盐度对溞状幼体变态、生长及存活的影响，以及不同盐度对仔虾后生长、存活的影响。结果显示，不同盐度对脊尾白虾溞状幼体的变态率和存活率无显著性影响，但对仔虾的干质量影响显著，15和20盐度下仔虾的干质量显著高于其它盐度组(P0.05)；不同盐度对20日龄脊尾白虾的生长影响显著(P0.05)，其特定生长率随着盐度升高而逐渐增大，在盐度20时达到最大(P0.05)，当盐度超过20时其特定生长率又开始降低；同时由60日龄脊尾白虾鳃Na+-K+-ATPase的相对表达量可以看出，在高盐或低盐时Na+-K+-ATPase的相对表达量均较高，在盐度20时鳃Na+-K+-ATPase的相对表达量最低(P0.05)，经二次方程拟合计算，理论Na+-K+-ATPase的相对表达量最低时的盐度为17.53，此盐度可能为脊尾白虾成体的