几个血管 淋巴管相关基因的调控与功能分析-regulation and functional analysis of several genes related to vascular lymphatic vessels.docx

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日摘要基因是遗传的物质基础，生物体的一切生命现象如生长、发育、代谢、衰老和死亡等均与基因密切相关。基因的功能和基因的表达调控很大程度上决定了微观世界的细胞进程与宏观世界的生命现象。对基因功能和基因表达调节的研究可在一定程度上从分子水平揭示生命现象和疾病的本质。血管和淋巴管是体内两个最大的管状网络系统，对于胚胎发育和成体内环境稳态维持至关重要，许多血管、淋巴管相关基因调控着血管和淋巴管的形成并在其他生理过程中也展现出重要功能。本学位论文开展了三项关于几个重要的血管、淋巴管相关基因的调控与新功能的研究，分别如下：第一项研究是微小RNAmiR-503对两个最重要的血管生成因子-FGF2和VEGFA的表达调控研究。FGF2和VEGFA是最为重要的血管生成因子，已成为许多缺血性疾病和血管异常疾病的治疗靶点并在临床治疗中得到应用。这项研究发现miR-503可通过结合基因的3’-UTR同时靶向FGF2和VEGFA，并同时在mRNA水平和蛋白水平抑制FGF2和VEGFA的表达；另外，本研究还发现miR-503在血管富集型肿瘤-肝癌中表达沉默，原因是miR-503的启动子被甲基化介导的表观遗传修饰调节而导致其表达被抑制，因而对应的靶基因FGF2和VEGFA高表达；体内和体外实验模型均证实，高表达miR-503下调FGF2和VEGFA表达进而抑制肿瘤血管生成。同时，本研究也发现，血管生成信号通路的重要因子-缺氧环境和缺氧诱导因子HIF-1α均可促使miR-503表达下调，从而解除或缓解了miR-503对FGF2和VEGFA的表达抑制，增强FGF2和VEGFA的表达，促进血管生成，这揭示了一条缺氧条件和缺氧诱导因子促进血管生成的新机制：缺氧条件下缺氧诱导因子HIF-1α可通过下调miR-503表达、解除miR-503对血管生成基因FGF2和VEGFA的抑制来增强促血管生成信号。总体上，这项研究在功能上鉴定了一个新的血管生成抑制因子-miR-503，其分子机制是抑制血管生成因子FGF2和VEGFA的表达，并显示了miR-503可抑制肿瘤血管生成。这将为基于血管生成的疾病治疗如癌症等提供新的分子靶标和在已有的方法上采取新策略。第二项研究是缺氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α对淋巴管基因Prox1的转录调控研究。Prox1是一个关键的淋巴管发育与生成基因，对淋巴管的形成、维持和生成至关重要，但对Prox1自身的表达调控规律目前认识不多。缺氧信号通路是熟知的最为重要的血管生成调节因子之一，但缺氧信号通路与淋巴管生成的关系尚不明确。在本研究中，生物信息学分析发现Prox1启动子序列上存在高度保守的可被HIF-1α和HIF-2α结合的缺氧响应元件（Hypoxia-ResponsiveElement,HRE）；荧光素酶活性报告基因分析实验证实缺氧条件下可由HRE元件介导激活Prox1的转录；实时荧光定量PCR和WesternBlot检测揭示缺氧条件下和高表达HIF-1α或HIF-2α均可在mRNA水平和蛋白水平显著增加Prox1的表达量，而敲低HIF-1α和HIF-2α可消除缺氧条件引起的Prox1表达增加；EMSA和ChIP证实HIF-1α和HIF-2α在体内外均可结合Prox1启动子的HRE元件；这些结果说明，缺氧条件下，HIF-1α和HIF-2α可转录激活Prox1表达。这项研究揭示了淋巴管发育与生成中的关键基因-Prox1受缺氧条件下和缺氧诱导因子HIF-1α/HIF-2α的调控，这为缺氧条件下的淋巴管生成提供了新的证据，并揭示了缺氧条件下淋巴管生成的重要潜在分子机制。第三项研究是血管疾病先天性静脉畸形骨肥大综合征（KTS）相关基因-AGGF1的新功能研究。AGGF1是在KTS的分子遗传学研究中首次发现和克隆的一个新基因，并初步确定其备血管生成因子功能，即“血管基因”，但AGGF1基因的功能还有许多未知。本研究关注的是AGG