家蚕第18连锁群测交系ch-2 mln elp的分子定位和长形卵基因elp的候选基因分析-molecular localization of ch - 2 mln elp in the 18th linkage group of silkworm and analysis of candidate genes of long egg gene elp.docxVIP

万方数据 万方数据 A Thesis Submitted in Fulfillment of the Requirements For the Degree of Master of Science Molecular mapping of test mapping strain for 18th linkage group recessive elp,ch-2 and mln and Analisis of Candidate gene of elp gene in Silkworm，Bombyx mori Submitted by Liu Xianfang Supervised by Li Mu-wang Jiangsu University of Science and Technology June, 2014 江苏科技大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进 行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重 要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声 明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 年 月 日 江苏科技大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文 被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存 和汇编本学位论文。 本学位论文属于： (1)保密□，在 年解密后适用本授权书。 (2)不保密□。 学位论文作者签名： 指导教师签名： 年 月 日 年 月 日 摘要 摘 要 在研究家蚕的性状遗传过程中，在其第 18 连锁群上先后研究发现了 5 个突变基因， 它们分别为显性短节油蚕（Dominant obese translucent，Obs）、第二隐性赤蚁（The second recessive gene of chocolate larvae, ch-2）、暗化型(melanism, mln)、长形卵(Ellipsoid egg, elp)和白蚁(Undevelopped gonads，gon)突变。家蚕长形卵基因（Ellipsoid egg, elp）为 卵形突变基因，而第二隐性赤蚁(The second recessive gene of chocolate larvae, ch-2)和暗 化型(melanism, mln)两个基因则均属于家蚕体色变异基因。其均为来自家蚕第 18 连锁 群的隐性突变基因，控制家蚕不同的突变类型。长形卵(elp)突变的主要特征为突变体 的卵呈长椭圆形，其卵的长轴方向较正常卵显著增长；第二隐性赤蚁(ch-2)和暗化型 (mln)主要特征均呈现在体色的不同，第二隐性赤蚁基因(ch-2)是少数只在蚁蚕时期即 可分辨表型的体色突变型之一，主要特征为蚁蚕全身呈暗赤褐色，食桑后幼虫体色逐 渐恢复正常；暗化型(mln)则属于成虫期即蛾体色突变，主要表现为蚕蛾身体和翅均呈 灰黑色的体色突变。 家蚕卵形突变遗传机制的明晰及相关基因的克隆分析不仅对蚕业生产以及家蚕基 因保存具有重要的意义，对其它动物性状的遗传分析也有较好的借鉴作用。家蚕长形 卵的成功克隆也为研究卵壳的决定机制奠定基础。体色的研究对了解昆虫遗传多态 性、适应机制及进化等具有一定的意义。 家蚕长形卵(elp)、第二隐性赤蚁(ch-2)、暗化型(mln)在经典连锁图谱上的顺序和遗 传距离已经确定。本研究以这三个突变基因作为标志性基因，利用 SSR 和 STS 分子标 记技术，对这 3 个突变基因 elp、ch-2、mln 进行了分子定位研究，并根据家蚕基因组 精细图，将第 18 连锁群的经典遗传图、分子连锁图和基因组物理图进行了对应；并且 对长形卵基因进行图位克隆和候选基因进行了分析，其主要实验研究内容及结果如下： 1. 对家蚕第 18 连锁群隐性基因 elp、ch-2 和 mln 测交系的分子定位分析 采用中国农业科学院蚕业研究所提供的家蚕品种，正常黑蚁、正常卵及正常白蛾 品种 P50 与第二隐性赤蚁、长形卵及黑蛾三隐性测交系 W18 作为亲本，组配 F1 代及 正反交群体，F1 回交 W18 后获得回交群体(P50×W18)♀×W18♂ 和 W18♀×(P50 ×W18)♂，分别记作 BC1F 和 BC1M。利用已构建的家蚕 SSR 分子连锁图谱和根据家 蚕基因组精细图设计的 STS 标记，采用 BC1F 群体筛选与突变基因连锁的标记，进行 连锁分析，采用 BC1M 进行重组作图，构建遗传