多黏芽孢杆菌HD-1产I3-甘露聚糖酶的条件优化.docVIP

多黏芽孢杆菌HD-1产I3-甘露聚糖酶的条件优化-农学论文 多黏芽孢杆菌HD-1产I3-甘露聚糖酶的条件优化 程爱芳，邓政东，黄芳一，陈 文，周念波 （武汉生物工程学院生命科学与技术学院，武汉 ４３０４１５） 摘要：采用ＤＮＳ比色法，通过单因素试验和正交试验对多黏芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ）ＨＤ－１产β－甘露聚糖酶的培养基主要成分和培养条件进行优化。结果表明，该菌种产β－甘露聚糖酶的最适培养基为魔芋粉０．７５％、酵母膏１．００％、磷酸二氢钾０．０４％、硫酸镁０．０５％，培养基初始ｐＨ ９．０；最适培养条件为接种量６％，培养温度３１ ℃，培养时间２７ ｈ。在此优化条件下，多黏芽孢杆菌产β－甘露聚糖酶活性可达７２．６ Ｕ／ｍＬ。 关键词 ：多黏芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ）；β－甘露聚糖酶；发酵条件；优化 中图分类号：Ｑ９３９．９７文献标识码：A文章编号：0439－８114（２０15）01－0164-04 ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．０１．０42 Ｏｐｔｉｍｉｚing Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ Producing ｔｈｅ β-mａｎｎａｎａｓｅ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ＨＤ－１ ＣＨＥＮＧ Ａｉ－ｆａｎｇ，ＤＥＮＧ Ｚｈｅｎｇ－ｄｏｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｆａｎｇ－ｙｉ，CHEN Wen，ＺＨＯＵ Ｎｉａｎ－ｂｏ （School of Life Science and Technology，Ｗｕｈａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ of Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｗｕｈａｎ ４３０４１５， Ｃｈｉｎａ ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＤＮＳ， ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ used ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ＨＤ－１ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ β－ｍａｎｎａｎａｓｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍal ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ０．７５％ ｋｏｎｊａｃ，１．００％ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ，０．０４％ ＫＨ２ＰＯ４·３Ｈ２Ｏ， ０．０５％ ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ， ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｌ ｐＨ ９．０． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍal ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ６％ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ， ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ of ３１ ℃， ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｌｅｎｇｔｈ ２７ of ｈｏｕｒｓ． Ｕｎｄｅｒ these ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｔｈｅ β－ｍａｎｎａｎａｓｅ produced ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ＨＤ－１ was ７２．６ Ｕ／ｍＬ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ； β－ｍａｎｎａｎａｓｅ； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ； ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ 收稿日期：２０１４－０９－１６ 基金项目：武汉生物工程学院校级研究项目（２０１３ＪＹＩ０１） 作者简介：程爱芳（１９８０－），女，湖北武汉人，硕士，讲师，主要从事微生物发酵方面的研究，（电话）１５３２７１６４５８２（电子信箱）ｃａｆ２００２＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。 β－甘露聚糖酶是一种半纤维素水解酶，降解产物的非还原末端为甘露糖，其作用底物包括葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及β－甘露聚糖等［１－３］。β－甘露聚糖酶可以用于饲料工业，能消除甘露聚糖对单胃动物各种营养素的抗营养作用［４－６］，还可用于糖链结构的分析、造纸业、纺织业、石油业等。微生物是产生β－甘露聚糖酶的主要来源，且具有活力高、成本低、来源稳定、提取方便等明显优点［７，８］。本试验以多黏芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ）为生产菌株，通过单因素试验和正交试验［９，１０］对多黏芽孢杆菌产β－甘露聚糖酶的培养基成分和培养条件进行优化，以提高其产酶活力，为后续的开发利用奠定基础。 １ 材料与方法 １．１ 材料 １．１．１ 菌种 多黏芽孢杆菌突变菌株ＨＤ－１，由武汉生物工程学院发酵工程实验室保藏。 １．１．２ 培养基 斜面活化培养基：３ ｇ／Ｌ牛肉膏、１０ ｇ／Ｌ蛋白胨、５ ｇ／Ｌ氯化钠、２０ ｇ／Ｌ琼脂，ｐＨ ７．４；液体种子培养基：５ ｇ／Ｌ魔芋粉、１０ ｇ／Ｌ酵母膏、１ｇ／Ｌ硫酸镁、０．５ ｇ