hid1蛋白在线虫中的功能和作用机制研究-study on the function and mechanism of hi d1 protein in online worms.docxVIP

摘要?细胞必须具有有效而精密的机制，确保在糙面内质网上合成的各种蛋白，在反 面高尔基复合体上以出芽的方式通过不同的转运囊泡以不同的途径被分选、转运并 发挥其生理功能。分泌囊泡(secretory granules, SGs)也叫做致密核心囊泡(dense core vesicles, DCVs)是装载并转运分泌蛋白的载体，其在胞内的转运过程不仅涉及蛋白本 身(分泌蛋白和囊泡膜蛋白)的修饰、加工和装配，还涉及到多种囊泡特异组分的定向 转运和复杂的调控过程。hid-1 编码一个全新的蛋白，由 Ailion 和 Thomas 在筛选具有 Hid (high temperature-induced dauer formation)表型的线虫种系过程中发现。HID-1 蛋白高度保 守，在果蝇、小鼠和人类中都只有唯一的同源物。此外，hid-1 基因突变的线虫还具 有多种表型，如轻微的行动不协调(Unc)，对乙酰胆碱酯酶抑制剂的抗性(Ric)，排便 缺陷(Aex)等。本文主要利用线虫这个经典的动物模型对 HID-1 蛋白的作用机理和生 理功能进行深入的研究。本文第一部分为研究背景介绍，简要概述了分泌囊泡的生成、加工成熟、转运、 分选及分泌机制和学习记忆、信息整合的神经通路及分子机理。本文第二部分研究了 hid-1 蛋白参与学习记忆这个高级认知功能的调节过程，主 要是信息整合和联系性学习记忆。我们发现除了参与调节 NaCl-饥饿模式和温度-饥 饿模式这两种联系性学习记忆模式外，hid-1 基因还对两种感觉信号的整合及相应的 抉择行为有重要调控作用，并且确定了其功能的发挥主要是通过调节神经元内负责 神经多肽分泌的 DCVs 实现的。我们试图确定 hid-1 调节信息整合的信号通路，但遗 憾的是，我们只能排除 hid-1 不是通过 hen-1 途径和胰岛素受体信号途径来调节学习 记忆过程，下一步我们需要研究 hid-1 基因的作用靶点和信号通路，进而深入透析其 分子机制。? 本研究课题得到国家自然科学基金 ， 国家 973 基金(G1999054000, 2006CB0D1704)和中国科学院项目工程(KSCX2-SW-224, Y2004018)资助。第三部分通过电生理技术、荧光成像技术以及生物化学技术研究了 HID-1 作为一个高度保守的蛋白，是 DCVs 成熟、转运和再循环的必需调节因子。HID-1 主要定 位在高尔基复合体上，它的缺失会导致 DCVs 的可溶性内容物减少，但以高度聚集 形式存在于致密核心内的神经多肽却不受影响，此外还会引起特异膜蛋白的增加。 我们推测 HID-1 主要通过影响 DCVs 特异组分从早期内涵体到高尔基体的逆向转运， 从而影响囊泡的成熟和再循环过程，但它并不参与突触囊泡(synaptic vesicles, SVs) 的分泌。这些发现对于理解分泌囊泡成熟、转运及再循环回高尔基体的具体作用机 理有所帮助。本文第四部分研究了由黑寡妇蜘蛛分泌的神经毒素α-LTX 及其突变体α-LTXN4C 通过不同机制促进胰腺 β 细胞[Ca2+]i 升高。我们发现α-LTX 引起[Ca2+]i 的升高依赖于 细胞外液中的 Ca2+，并且这种升高可以被 La3+ 特异阻断。而α-LTXN4C 引起的[Ca2+]i 上升则依赖于二价阳离子的存在。关键词：hid- 1线虫学习记忆信息整合分泌囊泡Abstract?Peptide hormones and neuropeptides are packaged and stored in specialized intracellular organelles called secretory granules (SGs, also known as dense core vesicles, DCVs). DCV is the specialized organelle that facilitates long-term intracellular storage of secretory proteins at high concentration. While DCVs have been known to be prominent post-Golgi carriers for almost 50 years, the exact mechanism of how DCVs maturation and its specific components recycled back to TGN remains largely u