hic1甲基化调控hic1sirt1通路在慢性胰腺炎恶性转化中的作用分析-analysis of the role of hi c1 methylation in regulating hi c1 sirt 1 pathway in the malignant transformation of chronic pancreatitis.docxVIP

目录中文引言 1英文引言 4中文摘要 8英文摘要 111材料方法 155结果 3311. 临床胰腺组织中 HIC 甲基化及 HIC1/SRIT1 信号通路检测 3312. 5-AZA-DC 对胰腺癌细胞 HIC1/SIRT1 信号通路及生物学行为的影响 383. 外源性基因表达调控 HIC1/SIRT1 信号通路对胰腺癌细胞行为的影响 444. HIC1/SIRT1 信号通路影响细胞学行为机制研究 47讨论 48全文小结 55参考文献 56综述 66致谢 84附录 1 在校攻读学位期间发表论文 86附录 2 英文缩略表 87前言流行病学研究显示慢性胰腺炎是胰腺癌发生的独立高危因素[1, 2]。慢性胰腺炎发 生恶性转化的危险性难以估计，目前流行病学研究结果表明其相对危险性从 2.3 到 27.2 不等。1993 年 Lowenfels 对 2015 例慢性胰腺炎患者的多中心国际化大样本队列 研究发现，慢性胰腺炎患者发生胰腺癌的的危险性为一般人群的 14.4 倍，慢性胰腺炎 患者确诊 10 年和 20 年后，胰腺癌累积发病风险达到 1.8%和 4.0%[3]。Talamini 等对 715 例慢性胰腺炎患者随访 10 年发现，胰腺癌的标准化发病比为 18.5[4]。遗传性慢性 胰腺炎是慢性胰腺炎中的特殊类型，发生胰腺癌危险性更高[5]，70 岁时胰腺癌累积发 生风险高达 40%。最近 Wang W 等对国内 420 例慢性胰腺炎患者平均随访 9 年发现有 4 例发生恶性转化，胰腺癌的标化发病比高达 27.2[6]。慢性胰腺炎发生恶性转化的机制尚不明确[7]。分子流行病学研究认为在慢性炎症 进展过程中，由于组织微环境的变化，细胞因子、趋化因子、氧自由基等炎症介质的 持续表达异常会导致细胞基因组损伤，反复累积的损伤将导致 DNA 修复失败、细胞 增殖失去正常调控并最终诱导细胞恶性转化[8]。此外，慢性炎症还可以影响某些基因 的的表观遗传学修饰，遗传给子代细胞并有潜在的促瘤作用。表观遗传学机制主要包 括 DNA 甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、基因印记以及非编码 RNA 的干扰。其 中抑癌基因发生甲基化沉默在肿瘤发生中的作用研究较为广泛[9]。Nishida N 等在正常 肝脏、慢性肝炎和肝癌临床组织中检测了 19 种高甲基化倾向的基因，发现随着慢性 肝炎病程的进展和肝癌的形成，基因甲基化的比率逐渐增加[10]。Hahn MA 使用基因 工程法敲除小鼠 Gpx1/2 基因，构建慢性肠炎到肠癌的动物模型。通过对该动物模型 的研究发现在慢性肠炎到肠癌的进展过程中逐渐出现组织特异性的基因启动子甲基 化；在肿瘤组织中出现的异常甲基化基因中，有 60%也发生在慢性肠炎组织。研究者 认为恶性转化过程中的基因异常甲基化受到 PcG 复合物的调控，其出现和肿瘤发生相 关而并非是由于模型鼠的老龄化所造成[11]。胰腺上皮内瘤样病变（PanINs）和导管内 乳头状粘液瘤（IPMNs）一般认为是胰腺癌的早期病变，研究发现 p16、ppENK 等基 因在 PanINs 和 IPMNs 中在发生启动子高甲基化[12, 13]。因此有必要从表观遗传学的角度深入探讨慢性胰腺炎向胰腺癌的发生机制。肿瘤高甲基化基因 1（hypermethylated in cancer 1，HIC1）最早是作为肿瘤抑制 基因从 17 号染色体 17P13.3 区段的 CpG 岛分离出来。这段染色体区域在许多肿瘤中 发生甲基化或杂合性缺失，因此分离后被命名为肿瘤高甲基化基因[14]。HIC1 编码产 物作为转录抑制因子，可以调控 SIRT1、FGFBP1、EFNA1、E2F1、TCF4、CCND1、 ATOH1 等信号分子以及 wnt 通路[15]、TGF-β通路[16]、Hedgehog 通路[17]等多种细胞信 号通路，在细胞的增殖、周期调控、DNA 损伤修复、肿瘤血管形成等发面发挥重要 作用[18]。研究发现 HIC1 在乳腺癌[19]、非小细胞肺癌[20]、前列腺癌[21, 22]、肝癌[23]、胃 癌[24]、食管癌[25]等多种人类肿瘤中发生高甲基化。Kanai Y 发现 HIC1 基因甲基化水 平在慢性肝炎到肝癌中逐渐增加，推测其参与了慢性肝炎到肝癌的恶性转化过程，这 一推测也得到后来 Hahn MA 的研究支持[10, 23]。Tan AC 检测了胰腺癌组织中 807 种基 因共 1505 个 CpG 位点的甲基化，发现有包括 HIC1、DBC1、PTCH1、MOS 在内的 61 种基因发生高甲基化，但对其作用机制未做深入探讨[26]。综上我们推测 HIC1 启动 子甲基化可能参与慢性胰腺炎到胰腺癌的转化过程，在我们的试验中，会首先对慢性