hif 1α对人胰腺癌细胞 tlr4表达影响的体外体内研究-effects of hif 1α on tl r4 expression in human pancreatic cancer cells in vitro and in vivo.docxVIP

协和医院的图标（该图片免费领取）独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其 他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切 法律后果。学位论文作者签名： 日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□ ，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√” ）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日目录前 言1中文摘要5ABSTRACT. 6第一部分TLR4 与 HIF-1Α在胰腺癌中表达及相关性的探讨 11引言 11实验材料12实验方法14实验结果20讨论24参考文献27第二部分缺氧微环境中 HIF-1Α对 TLR4 基因表达调控作用的调控作用29引言29实验资料30实验方法32实验结果38讨论41参考文献43第三部分RNA 阻断 HIF-1Α对裸鼠胰腺癌移植瘤生长及 TLR4 表达的影响46引言46实验材料47实验方法48结果51讨论53参考文献55综述一58综述二71附录一 英文缩略词表84附录二 博士研究生期间发表论文85 致谢86HIF-1α对人胰腺癌细胞 TLR4 表达影响的体外体内研究博士研究生：范平导师：吴河水 教授前 言胰腺癌是一种常见的严重危害人类生命健康的消化系统恶性肿瘤，由于其发 病隐蔽，早期症状不明显，解剖位置特殊以及转移较早等特点，大多数患者就诊 时已为局部进展或出现转移，仅不到1/5的患者可行手术，完全切除者中位生存 期为2年，5年生存率不到20%，无法切除的局部进展期胰腺癌中位生存期不到1 年,而有转移者不到6个月[1]，死亡率极高，总体5年生存率低于5% [2]。胰腺癌是一种常见的人类恶性实体肿瘤，血管缺乏时胰腺癌在影像学中的一 个突出特征[3]，血供少，胰腺癌细胞长期处于严重的乏氧和营养匮乏状态。其 血供相对缺乏且无包膜，常常向周围组织和器官浸润和扩散，临床上以临近器官 的转移较为普遍。此外，胰腺癌还具有血管性浸润和嗜神经生长的典型恶性生物 学特性。目前，针对胰腺癌患者多采用以手术治疗为主辅以放、化疗的综合治疗 手段，但是临床治疗效果并无明显提高，究其原因主要是对胰腺癌发生发展机制 的研究尚未完全清楚。目前普遍认为缺氧微环境是人类恶性实体肿瘤的基本特征之一。缺氧诱导因 子-1(hypoxia- inducible factor-1，HIF-1)是广泛表达于人和哺乳动物细胞内的一种 核转录因子，它是调控缺氧应答的关键因子，也是近年来研究的转录因子的热点 之一。HIF-1 为异二聚体，由 HIF-1α 和 HIF-1β两个亚基聚合而成，前者的表达 受细胞内氧浓度水平的严格调控，后者则结构性表达于细胞内。在常氧状态下， HIF-1α极不稳定，并易被脯氨酰羟化酶(PHD)羟基化，然后与 von Hippel-Lindau 蛋白靶向结合，最后经泛素化-蛋白酶途径而被降解[4]。而缺氧条件时 HIF-1α 亚 基的羟基化作用被完全抑制，致使 HIF-1α稳定并可转运进入细胞核，与 HIF-1β 亚基发生异二聚化，形成活化的 HIF-1 复合物，然后通过招募转录共激活因子p300/CBP，与靶基因的启动子上的缺氧反应元件内的（HREs）相结合，调控多种缺氧反应基因的表达，促进肿瘤细胞更好适应微环境的应激[5,6]，并对肿瘤细 胞增殖、凋亡、能量代谢、肿瘤侵袭和转移等起着极为重要作用[7,8]。最近发现 HIF-1α在胰腺癌组织和细胞中存在高表达，并与肿瘤放侵袭、转移与化疗耐受以 及临床预后等密切相关[9-11]。Toll 样受体(Toll-like receptors，TLRs)是一种类似果蝇 toll 蛋白的并具有较 高同源性的跨膜蛋白,他们在多种生物细胞中发现的被发现，属于白介素 1 受体(IL-1R)超家族成员。目前在哺乳动物细胞中发现至少有 13 个成员，是重要的天 然免疫分子[12]。TLRs 主要表达于各种免疫细胞，近年来研究发现，Toll 样受体 不仅表达于免疫细胞，也表达于多种肿瘤细胞[13]。肿瘤细胞中 Toll 样受体的激 活不仅促进了肿瘤细胞的增殖还能使肿瘤抗凋亡的能力增强，另外 TLRs 的激活 还能使肿瘤细胞产生炎症细胞因子及免疫抑制分子，这些最终使得肿瘤细胞对细 胞毒性淋巴细胞