hif1α glut1及ldh5在结直肠癌中的表达及其临床意义-expression and clinical significance of hi f1 α glut 1 and ld h5 in colorectal cancer.docxVIP

前言随着人民生活水平的提高及饮食结构的改变，国人的结直肠癌的发病率近几十年来呈上升趋势，上海、北京等大城市的发病率增速已经远超西方国家，现在我国结直肠癌的发病率已位于恶性肿瘤的第三位。我国结直肠癌的发病年龄多在40-60岁，高峰在50岁左右，但青年人（＜30岁）比例较高，约占12%-15%，这是本病在中国的一个特点。虽然随着结直肠癌的早期诊断、外科手术的创新及辅助放化疗等诊疗手段的改进，肿瘤术后的五年生存率有所提高，但是因大多数结直肠癌患者为中晚期病例，治疗效果不甚满意，严重威胁着人类健康。普遍认为，结直肠癌的病理演化过程为：正常粘膜—腺瘤—癌变。但是从分子生物学的角度来看，结直肠癌又是一种基因病，结直肠癌在发生发展过程中涉及到多种基因的异常改变，是多种基因改变逐渐累积的结果，不同基因在不同的阶段发挥着作用，其中参与肿瘤细胞适应缺氧的HIF-1α基因及其调控基因的表达在结直肠癌的发生发展过程中起着非常重要的作用。结直肠癌发生发展的关键就是对缺氧的适应性反应，缺氧状态可诱导多种细胞因子的表达及释放，促进肿瘤细胞的生长和浸润转移。HIF-1α是目前发现介导细胞低氧反应最关键的核转录因子，在结直肠癌的发生发展、侵袭转移和预后转归等方面起着重要作用[1]。HIF-1由α亚基(HIF-1α)和β亚基(HIF-1β)以异源二聚体形式组成。HIF-1α是功能亚基，也是唯一的氧调节亚单位，是HIF-1的限速因子，决定HIF-1的活性。HIF-1α蛋白表达、降解及活性受多种因素和机制调节，其中缺氧是最关键因素[2]。HIF-1a的目的基因中包含许多与葡萄糖代谢及糖酵解有关的酶，可诱导葡萄糖转运蛋白(GLUT)及与糖酵解相关酶如己糖激酶Ⅱ、醛缩酶A、醛缩酶C、乳酸脱氢酶等高表达[3-6]。缺氧时HIF-1α可上调这些酶的表达，使细胞适应缺氧，即Warburg效应。HIF-1α能够诱导肿瘤细胞的增殖、抑制其凋亡而促进肿瘤的发生发展，HIF-1α在胃肠道肿瘤中表达显著高于正常胃肠组织，并与胃肠道肿瘤患者的生存率、肿瘤分级、浸润深度及远处转移等关系密切[7-9]。HIF-1α与大肠癌的浸润转移、临床分期及预后密切相关，HIF-1α高表达的肿瘤组织具有较强的浸润与转移能力[10-11]。细胞对葡萄糖的摄取以主动转运和易化扩散的方式通过细胞膜，其中主要通过易化扩散的葡萄糖转运蛋白-1来完成。近年来作为介导葡萄糖转运的主要载体GLUT-1与恶性肿瘤的关系成为研究的热点，GLUT-1是一种组织细胞进行跨膜转运葡萄糖的重要载体，是第一个被描述的调节葡萄糖转运的因子，它对葡萄糖分子有很高的亲合力，在相对低浓度葡萄糖的状态下也能转运葡萄糖分子。在许多恶性癌组织中，葡萄糖进入细胞内是一被动过程，细胞外葡萄糖在细胞膜上葡萄糖转运体(GLUT)转运下才能进入细胞内并开始糖酵解过程。恶性肿瘤细胞糖酵解活跃，进入细胞内的葡萄糖也相应增多，细胞膜上葡萄糖转运蛋白数量增加及其与葡萄糖亲和力的增加,均可提高葡萄糖进入细胞内代谢。GLUT-1在恶性肿瘤中过度表达，其表达与HIF-1a的表达呈正相关，其表达水平与肿瘤转移及预后密切相关[12-14]。乳酸脱氢酶的主要作用是催化丙酮酸和乳酸间的相互转化，是细胞进行糖酵解过程中重要的氧化还原酶，因其分子结构的不同可分为5种同工酶(LDH1～LDH5)。其中LDH5最易将酮酸转变为乳酸，有利于无氧代谢。因肿瘤细胞无氧酵解占优势，故肿瘤组织中不但可检测到ＬＤＨ，其表达也较正常组织为高[15-16]。恶性肿瘤导致的乳酸脱氢酶升高多为ＬＤＨ４和ＬＤＨ５升高[17]。LDH5在结直肠癌组织中高表达，并与肿瘤的浸润及远处转移密切相关[18]。目前尚无结直肠癌组织中HIF-1α与GLUT-1及LDH-5表达相关性的研究报道。本研究主要应用免疫组织化学方法检测结直肠癌组织中HIF-1α、GLUT-1及LDH-5表达，并分析三者间的相关性，探讨结直肠癌发生发展过程中HIF-1α、GLUT-1及LDH-5表达的相互关系及其与结直肠癌组织分化程度和临床分期间的关系，为探索结直肠癌的发病机制及临床的防治提供新的思路和实验依据。材料与方法1、标本来源实验组标本来源于贵州省人民医院病收集2012年3月-2013年9月贵州省人民医院胃肠外科临床资料完整的手术切除结直肠癌标本82例。所有标本术前均未进行放化疗，并经病理确诊为腺癌组织，病例标本中男性例数为：42例，女性标本为：40人。年龄19～77岁，平均64岁。根椐中国2010版结直肠癌诊疗规范进行临床病理分期（即pTNM分期）：I、II期44例，III、Ⅳ期38例。对照组另取正常结直肠粘膜组织20例作对照，标本取自结肠镜下采集的正常的结直肠粘膜组织，并经病理观察证实且排除重度不典型增生。男10例，女10例，年龄20-7