(生物化学和 与分子生物学)3-酶.ppt

酶的最适温度不是酶的特征性常数，它与反应进行的时间有关。 酶的活性虽然随温度的下降而降低，但低温一般不使酶破坏。温度回升后，酶又恢复其活性。 四、pH通过改变酶和底物分子解离状态影响酶促反应速率 酶催化活性最高时反应体系的pH称为酶促反应的最适pH (optimum pH)。 pH对某些酶活性的影响 最适pH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度、以及酶纯度等因素的影响。 五、抑制剂可降低酶促反应速率 酶的抑制剂(inhibitor) 酶的抑制区别于酶的变性： 抑制剂对酶有一定选择性 引起变性的因素对酶没有选择性 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白 变性的物质称为酶的抑制剂。 抑制作用的类型 不可逆性抑制 (irreversible inhibition) 可逆性抑制 (reversible inhibition) 竞争性抑制 (competitive inhibition) 非竞争性抑制 (non-competitive inhibition) 反竞争性抑制 (uncompetitive inhibition) 根据抑制剂和酶结合的紧密程度不同，酶的抑制作用分为： 有机磷化合物 ?? 羟基酶 解毒 -- -- -- 解磷定(PAM) 重金属离子及砷化合物 ?? 巯基酶 解毒 -- -- -- 二巯基丙醇(BAL) 概念 举例 抑制剂通常以共价键与酶活性中心的必需基团相结合，使酶失活。此类抑制剂不能用透析、超滤等方法予以去除。 （一）不可逆性抑制剂与酶共价结合 * 有机磷化合物 如：敌百虫、敌敌畏、乐果和马拉硫磷等 有机磷化合物 羟基酶 失活的酶 酸 * 胆碱酯酶 * 解毒剂 如：解磷定（碘化醛肟甲基吡啶，PAM） 阿托品 * 低浓度重金属离子和砷化合物 如：路易斯气 * 路易斯气与糜烂性毒剂 路易士气 巯基酶 失活的酶 酸 失活的酶 BAL 巯基酶 BAL与砷剂结合物 （二） 可逆性抑制剂与酶非共价结合 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 类型 概念 抑制剂通常以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结合，使酶的活性降低或消失；抑制剂可用透析、超滤等方法除去。 竞争性抑制剂与底物竞争结合酶的活性中心 抑制剂与底物的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶与底物形成中间产物 ，这种抑制作用称为竞争性抑制作用。 二、酶通过促进底物形成过渡态而提高反应速率 （一）酶比一般催化剂更有效地降低反应活化能 酶和一般催化剂一样，加速反应的作用都是通过降低反应的活化能 (activation energy) 实现的。 活化能：底物分子从基态转变到过渡态所需的能量。 反应总能量改变 非催化反应活化能 酶促反应 活化能 一般催化剂催 化反应的活化能 能 量 反 应 过 程 底物 产物 酶促反应活化能的改变 （二）酶与底物结合形成中间产物 酶底物复合物 E + S E + P ES (过渡态) 诱导契合作用使酶与底物密切结合 酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相互变形和相互适应，进而相互结合。这一过程称为酶-底物结合的诱导契合(induced-fit) 。 羧肽酶的诱导契合模式 底物 2. 邻近效应与定向排列使诸底物正确定位于酶的活性中心 酶在反应中将诸底物结合到酶的活性中心，使它们相互接近并形成有利于反应的正确定向关系。 这种邻近效应(proximity effect)与定向排列(orientation arrange)实际上是将分子间的反应变成类似于分子内的反应，从而提高反应速率。 邻近效应与定向排列： 酶的活性中心多是酶分子内部的疏水“口袋”，酶反应在此疏水环境中进行，使底物分子脱溶剂化 (desolvation)，排除周围大量水分子对酶和底物分子中功能基团的干扰性吸引和排斥，防止水化膜的形成，利于底物与酶分子的密切接触和结合。这种现象称为表面效应(surface effect)。 3. 表面效应使底物分子去溶剂化 胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶活性中心“口袋” （三）酶的催化机制呈多元催化作用 1）亲核催化作用(nucleophilic catalysis) 2）共价催化作用(covalent catalysis) 3）亲电催化（electrophilic catalysis） 1.酸-碱催化作用（general acid-base catalysis） 2.亲核催化和亲电子催化作用 胰凝乳蛋白酶的共价催化和酸-碱催化机制 第三节 酶促反应动力学 Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction 酶促反应动力学：研究各种因素对酶