il17对脉络膜内皮细胞增殖 移行及小管成形的影响-effects of il17 on proliferation and migration of choroidal endothelial cells and tubule formation.docx

英汉缩略语名词对照英文缩写CECs英文全称Choroidal endothelial cells中文全称脉络血管内皮细胞IL-17Interleukin-17白介素-17WVFVon Willebrand factor血管性血友病因子FCMFlow cytometry流式细胞术IL-17RAInterleukin-17 receptor A白介素-17 受体 AIL-17RCInterleukin-17 receptor C白介素-17 受体 CWST-1Water-soluble tetrazolium水溶性四唑盐PI3KPhosphatidylinositol 3 kinase磷脂酰肌醇 3 激酶AMDAge-related macular degeneration年龄相关性黄斑变性CNVChoroidal neovascularization脉络膜新生血管RPEretinal pigment epithelium视网膜色素上皮VEGFvascular endothelial growth factor血管内皮生长因子mRNAMessenger ribonucleic acid信使核糖核酸FBSfetal bovine serum胎牛血清DIPA4,6-diamidino-2-phenylindole4,6-二脒基-2-苯基吲哚F-actinMicrofilamentous肌动蛋白微骨架TH-17T-helper17T-辅助细胞 17MCP-1monocyte chemotactic protein 1单核细胞趋化蛋白-1TLRsToll-like recepersToll 受体1IL-17 对脉络膜内皮细胞 增殖、移行及小管成形的影响摘要目的：探讨白介素（interleukin, IL）-17 对人脉络膜血管内皮细胞（choroidal endothelial cells, CECs）增殖，移行及管腔形成的影响。 方法：1. 在传统的消化法，过滤法的基础上，采用 CD31 免疫磁珠原代分离培养人的 CECs，倒置相差显微镜下观察 CECs 的形态。细 胞免疫荧光法检测 CECs 血管性血友病因子(Von Willebrand factor, WVF)因子的表达，流式细胞术（flow cytometry, FCM）检测 CECs 的 CD31 的表达。2. 细胞免疫荧光法及 FCM 检测人 CECs 的 IL-17 受体(IL-17 recepter, IL-17R)A 及 IL-17RC 的表达。3. 水溶性四唑盐( water-soluble tetrazolium, WST-1)比色实验检测 IL-17 对人 CECs 增值的影响。细胞 Transwell 趋化实验以及细胞划痕 愈合实验检测 IL-17 对人 CECs 移行的影响。利用 Matrigel 基质胶管 腔形成实验观察 IL-17 对人 CECs 管腔形成的影响。4. 应用细胞免疫荧光染色观察 IL-17 对人 CECS 细胞骨架重构的 影响。结果：1. 采用 CD31 免疫磁珠法培养纯化 CECs，经免疫荧光鉴 定其 WVF 因子表达阳性，经 FCM 检测其 CD31 表达率达 95%以上，2获得了活力强、纯度高、可持续传代的 CECs。2. 通过细胞免疫荧光法及 FCM 检测人 CECs 表达低 IL-17RA 及 高表达 IL-17RC3. IL-17 对人 CECs 增殖没有明显的影响。IL-17 能促进 CECs 的 移行以及管腔形成，并且磷脂酰肌醇 3 激酶（Phosphatidylinositol 3 kinase，PI3K）的抑制剂能抑制人 CECs 的移行及细胞骨架的重构。结论：在体外，Il-17 能通过促进人 CECs 的移行以及管腔形成表 现出其促血管生成效应。Il-17 促进人 CECs 的移行是通过 PI3K 通路 引起细胞骨架重构而实现的。关键词：IL-17，CECs，增殖，移行，管腔形成，细胞骨架重构3EFFECTS OF IL-17 ON CHOROIDAL ENDOTHELIAL CELLS PROLIFERATION, MIGRATION AND TUBE FORMATIONABSTRACTObjective: To investigate the influence of IL-17 on human choroidal endothelial cells proliferation, migration, tube formation.Methods: 1. Human choroidal endothelial cells were obtained using a methods of CD31 coated