il17及jak抑制剂ag490对泡沫化巨噬细胞abca1表达的影响-effects of il17 and jak inhibitor ag 490 on expression of abca 1 in foam macrophages.docx

摘要目的:白介素-17（Interleukin - 17，IL-17）是新近发现的一个促炎症细胞因子， 具有致动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的作用，酪氨酸蛋白激酶-信号转导 及转录激活因子（Janus kinase signal transducers and activators of transcription， JAKs-STATs）是其发挥作用的途径之一。三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ATP-bi nding cassette transporter，ABCA1）在细胞中的主要作用为促进细胞内胆固醇 运输和减少细胞内的炎症因子。双面神激酶（Janus kinase ，JAK）抑制剂2-氰 基 -3-(3，4-二羟基苯基)-N-(苯甲基)-2-丙烯酰胺(2-cyano-3-(3，4-dihydroxyp henyl)-N-( phenylmethyl)-2-propenamide，AG490)为JAK抑制剂，能阻断JAKs-ST ATs信号通路。本文通过观察IL-17及AG490对泡沫化巨噬细胞ABCA1mRNA及 蛋白的表达情况，探讨IL-17及AG490对泡沫化巨噬细胞的作用。方法:1.检测 IL-17 对泡沫化巨噬细胞 ABCA1mRNA 及蛋白的表达情况：THP-单 核（/dict_result.aspx?searchword=thp-1%B5%A5%BA%CB%CF%B8%B0%FBamp;tjType=sentenceamp;styleamp;t=thp-1%2BmonocyteThp-1 monocyte，THP-1）细胞经佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate， PMA）（100 nmol/L）诱导 24h-48h 形成巨噬细胞，经氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）(50μg/mL)泡沫化后建立巨噬细胞泡沫化模型， 油红 O 乙醇染液鉴定泡沫化巨噬细胞。上述泡沫化巨噬细胞中分别加入 IL-17（100ng/mL），不同时间点（0h，6h，12h，24h）收取细胞，分别提取 RNA 及 蛋白，RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及蛋白的表达。上述泡沫 化巨噬细胞中加入 IL-17(0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL），24h 后收取 细胞，分别提取 RNA 及蛋白，RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及 蛋白的表达。2. 检测 JAK 抑制剂 AG490 与 IL-17 对泡沫化巨噬细胞 ABCA1mRNA 及蛋 白的表达情况: IL-17（100ng/mL）及 AG490（0umol/L、10umol/L、20umol/L、 30umol/L）共处理泡沫化巨噬细胞 24h 后收取细胞，分别提取 RNA 及蛋白， RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及蛋白的表达。II结果:1.THP-1 细胞呈圆形，悬浮生长，经 PMA（100 nmol/L）诱导 24h-48h 后成 为梭形的贴壁巨噬细胞，并伸出伪足，ox-LDL(50μg/mL) 诱导巨噬细胞形成泡 沫化巨噬细胞，其特征为脂质成份增多，聚集成滴，能被油红 O 乙醇染液染成 红色。2.随着泡沫化巨噬细胞中 IL-17 浓度的增加（0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、 100ng/mL），RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及蛋白的表达随着 IL-17 浓度增加而减少（p＜0.05），随着泡沫化巨噬细胞中 IL-17 作用时间的延 长（0h、6h、12h、24h），RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及蛋 白的表达随 IL-17 作用时间增加而减少（p＜0.05）。3.JAK 抑制剂 AG490 与 IL-17（100ng/mL）共同处理泡沫化巨噬细胞后， RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及蛋白的表达随着泡沫化巨噬细 胞中 AG490 浓度增加（0umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L）而增加（p＜0.05）。 结论:1.通过 ox-LDL 诱导巨噬细胞能够成功构建巨噬细胞泡沫化模型。2.IL-17 能够减少泡沫化巨噬细胞 ABCA1mRAN 及蛋白的表达，并呈时间和 浓度依赖性。3.AG490 能够减弱 IL-17 对泡沫化巨噬细胞 ABCA1mRNA 及蛋白的表达， 提示 IL-17 可能通过 JAKs-STATs 信号通路影响 ABCA1