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il17及jak抑制剂ag490对泡沫化巨噬细胞abca1表达的影响-effects of il17 and jak inhibitor ag 490 on expression of abca 1 in foam macrophages.docx

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il17及jak抑制剂ag490对泡沫化巨噬细胞abca1表达的影响-effects of il17 and jak inhibitor ag 490 on expression of abca 1 in foam macrophages

摘要目的:白介素-17(Interleukin - 17,IL-17)是新近发现的一个促炎症细胞因子, 具有致动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的作用,酪氨酸蛋白激酶-信号转导 及转录激活因子(Janus kinase signal transducers and activators of transcription, JAKs-STATs)是其发挥作用的途径之一。三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-bi nding cassette transporter,ABCA1)在细胞中的主要作用为促进细胞内胆固醇 运输和减少细胞内的炎症因子。双面神激酶(Janus kinase ,JAK)抑制剂2-氰 基 -3-(3,4-二羟基苯基)-N-(苯甲基)-2-丙烯酰胺(2-cyano-3-(3,4-dihydroxyp henyl)-N-( phenylmethyl)-2-propenamide,AG490)为JAK抑制剂,能阻断JAKs-ST ATs信号通路。本文通过观察IL-17及AG490对泡沫化巨噬细胞ABCA1mRNA及 蛋白的表达情况,探讨IL-17及AG490对泡沫化巨噬细胞的作用。方法:1.检测 IL-17 对泡沫化巨噬细胞 ABCA1mRNA 及蛋白的表达情况:THP-单 核(/dict_result.aspx?searchword=thp-1%B5%A5%BA%CB%CF%B8%B0%FBamp;tjType=sentenceamp;styleamp;t=thp-1%2BmonocyteThp-1 monocyte,THP-1)细胞经佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)(100 nmol/L)诱导 24h-48h 形成巨噬细胞,经氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)(50μg/mL)泡沫化后建立巨噬细胞泡沫化模型, 油红 O 乙醇染液鉴定泡沫化巨噬细胞。上述泡沫化巨噬细胞中分别加入 IL-17(100ng/mL),不同时间点(0h,6h,12h,24h)收取细胞,分别提取 RNA 及 蛋白,RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及蛋白的表达。上述泡沫 化巨噬细胞中加入 IL-17(0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL),24h 后收取 细胞,分别提取 RNA 及蛋白,RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及 蛋白的表达。2. 检测 JAK 抑制剂 AG490 与 IL-17 对泡沫化巨噬细胞 ABCA1mRNA 及蛋 白的表达情况: IL-17(100ng/mL)及 AG490(0umol/L、10umol/L、20umol/L、 30umol/L)共处理泡沫化巨噬细胞 24h 后收取细胞,分别提取 RNA 及蛋白, RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及蛋白的表达。II结果:1.THP-1 细胞呈圆形,悬浮生长,经 PMA(100 nmol/L)诱导 24h-48h 后成 为梭形的贴壁巨噬细胞,并伸出伪足,ox-LDL(50μg/mL) 诱导巨噬细胞形成泡 沫化巨噬细胞,其特征为脂质成份增多,聚集成滴,能被油红 O 乙醇染液染成 红色。2.随着泡沫化巨噬细胞中 IL-17 浓度的增加(0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、 100ng/mL),RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及蛋白的表达随着 IL-17 浓度增加而减少(p<0.05),随着泡沫化巨噬细胞中 IL-17 作用时间的延 长(0h、6h、12h、24h),RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及蛋 白的表达随 IL-17 作用时间增加而减少(p<0.05)。3.JAK 抑制剂 AG490 与 IL-17(100ng/mL)共同处理泡沫化巨噬细胞后, RT-PCR、Western blotting 检测 ABCA1mRNA 及蛋白的表达随着泡沫化巨噬细 胞中 AG490 浓度增加(0umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L)而增加(p<0.05)。 结论:1.通过 ox-LDL 诱导巨噬细胞能够成功构建巨噬细胞泡沫化模型。2.IL-17 能够减少泡沫化巨噬细胞 ABCA1mRAN 及蛋白的表达,并呈时间和 浓度依赖性。3.AG490 能够减弱 IL-17 对泡沫化巨噬细胞 ABCA1mRNA 及蛋白的表达, 提示 IL-17 可能通过 JAKs-STATs 信号通路影响 ABCA1

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