拮抗真菌glp-26的筛选及次生代谢产物的初步研究-screening of antagonistic fungi glp - 26 and preliminary study on its secondary metabolites.docxVIP

PCR 扩增 45 PCR 扩增产物的检测 46 6.2 结果与分析47 6.2.1 GLP-26 菌株培养特征 47 6.2.2 GLP-26 菌株形态特征 47 6.2.3 GLP-26 菌株 DNA 提取结果 48 6.3 讨论49 第七章 GLP-26 菌株发酵液及菌丝体提取液中抑菌成分的初步分离 50 7.1 材料与方法50 7.1.1 材料50 7.1.1.1 供试菌株 50 7.1.1.2 试剂 50 7.1.1.3 仪器 50 7.1.2 方法50 7.1.2.1 GLP-26 菌丝体活性物质的提取 50 7.1.2.2 大孔吸附树脂分离 GLP-26 菌株发酵液活性物质 51 7.2 结果与分析52 7.2.1 GLP-26 菌丝体活性物质的提取 52 7.2.2 大孔吸附树脂分离 GLP-26 菌株发酵液活性物质 53 7.3 讨论53 第八章 结论55 致 谢57 参考文献58 附 录65 1 课题来源65 2 硕士学习期间论文发表情况65 图 版66 原 创 性 声 明70 贵州大学 贵州大学 2009 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 1 摘 要 作者采用高氏一号培养基从贵州、山东和广东等省份的土样中分离到 156 株真菌菌株和放线菌菌株，用抑制菌丝生长速率法对其发酵液进行了活性菌株的 筛选研究。筛选出 5 株高活性菌株，并将 GLP-26 菌株作为候选菌株进行了系统 的研究，主要研究结果如下： （1）对贵州、山东和广东等省份的土样进行菌株的分离纯化，共纯化到 156 株真菌菌株和放线菌菌株，采用抑制菌丝生长速率法对 156 株菌株发酵液进行了 生物活性初筛，生测结果表明，筛选出 5 株活性较好的菌株 SD-13 、SD-21、 GLP-7、GLP-17、GLP-26。对指示菌的抑制率均在 80%以上，其中 GLP-26 菌株 发酵液对多种病原菌的抑制率在 85%以上，抗菌效果最好，故确定为主要的候选 菌株。 （2）对 GLP-26 菌株发酵液进行了抗菌谱的测定。抑制菌丝生长速率法生 物测定结果表明，GLP-26 菌株发酵液对多种常见植物病原真菌具有较强的抑菌 活性，其中对玉米小斑病菌(Bipolarismaydis)、黄瓜灰霉病菌(Borrytiscinerea)和 油菜菌核病菌(Sclerotiuasclerotiorum)的抑制率达到 95%以上，表现为广谱抗菌 性。盆栽试验结果表明，GLP-26 菌株发酵液对小麦白粉病菌(Blumeriagraminis) 有一定的治疗保护作用，分别为 52.7%和 51.6%。GLP-26 菌株菌丝体提取物对 玉米小班病菌、烟灰霉病菌、油菜菌核病菌和黄瓜灰霉病菌有较好的抑制效果， 抑制率达到 80%以上，对油菜菌核的抑制率达到 95%以上。 （3）以黄瓜灰霉病菌(Borrytiscinerea)、烟灰霉病菌(Botrytiscinerea)和油菜 菌核病菌(Sclerotiuasclerotiorum) 为指示菌，测定了 GLP-26 菌株发酵液的稳定 性。结果表明，GLP-26 菌株连续培养 10 代，其发酵液的抗菌活性非常稳定。 GLP-26 菌株无论是在 4℃下，还是室温下保存，所产生发酵液的抑菌活性都是 稳定的。菌株在 4℃条件下保存 60d 后，其发酵液对病菌的抑菌活性基本没有变 化。GLP-26 菌株发酵液具有较好的热稳定性，而且在抗酸、碱方面，抗菌活性 依然显著。 （4）采用分子生物学方法 5.8S rDNA 序列分析和传统的鉴定方法相结合， 对 GLP-26 菌株进行了分类鉴定，根据形态学特征与 GLP-26 菌株的 5.8S rDNA 序列的分析结果表明， GLP-26 菌株属于镰刀菌属，可能是腐皮镰孢（Fusarium solani）的一个近缘种。 （5）采用色谱技术对 GLP-26 菌株发酵液及菌丝体中的活性成份分离进行 了初步的研究。 关键词：真菌；抗菌活性；抗菌谱；稳定性；鉴定；活性物质分离 图书分类号：S482.2+92 Abstract The 156 strains were separated from the soil collected in Guizhou province 、 Shandong province and Guangdong province of China.By means of mycelium growth rate，the fungicidal activity of fermentation products of the strains was studie