结核分枝杆菌小分子热休克蛋白hsp163的表达 纯化和鉴定-expression, purification and identification of small molecule heat shock protein hsp 163 in mycobacterium tuberculosis.docx

结核分枝杆菌小分子热休克蛋白 结核分枝杆菌小分子热休克蛋白 Hsp16.3 的表达、纯化和鉴定 PAGE PAGE 3 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除 文中已经注明引用的内容外 ，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主 管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于少量复制并允许论文进入学校 图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编 出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 研究生签名： 时间： 年 月 日 导师签名： 时间： 年 月 日 目 录 中文摘要???????????????????????????????? Ⅰ 英文摘要???????????????????????????????? Ⅱ 英文缩略词表?????????????????????????????? Ⅲ 前 言????????????????????????????????? 1 材料与方法??????????????????????????????? 3 结 果????????????????????????????????? 19 讨 论????????????????????????????????? 29 结 论????????????????????????????????? 31 参考文献???????????????????????????????? 32 文献综述???????????????????????????????? 34 附 录????????????????????????????????? 41 致 谢????????????????????????????????? 44 作者简历???????????????????????????????? 45 导师评阅表??????????????????????????????? 46 结核分枝杆菌小分子热休克蛋白 结核分枝杆菌小分子热休克蛋白 Hsp16.3 的表达、纯化和鉴定 摘 要 目的：构建结核分枝杆菌小分子热休克蛋白 Hsp16.3 原核表达载体，获得 Hsp16.3 蛋白，并应用生 物信息学技术对结核分枝杆菌小分子热休克蛋白 Hsp16.3 进行分析，获取该基因的相关信息。 方法：以结核分枝杆菌 H37Rv 株基因组 DNA 为模板，应用 PCR 方法扩增 Hsp16.3 基因，以 PET28a 质粒为载体，构建重组质粒 PET28a- Hsp16.3，测序正确后，转入宿主菌 BL21（DE3）进行诱导表 达。表达的融合蛋白经 SDS，Western Blot 分析鉴定，并通过镍柱进行亲和层析纯化，表达蛋 白分子质量约 17 kD 能被结核杆菌 16 kD 单克隆抗体和小鼠抗 His Tag 单克隆抗体识别。利用 Pmtparam， Protseale，HMMTOP， TMHMM ，GOR4，ProtFun 等软件，进行生物信息学分析结 核分枝杆菌小分子热休克蛋白 16.3 的氨基酸组成、理论等电点、结构域、疏水性、跨膜区、糖基化 位点、磷酸化位点及二级结构等。 结果：成功构建了 Hsp16.3 原核表达载体 PET28a- Hsp16.3，并在宿主菌 BL21（DE3）中表达。生物 信息学分析结核分枝杆菌小分子热休克蛋白 16.3 白分子式为：C716H1131N197O225S4，分子量为 16227.2， 理论等电点为 5.00。该蛋白氨基酸序列中含有α-螺旋(Alpha helix) 46 处，延伸链(Extended strand) 25 处，无规则卷曲(Random coil)73 处及 5 个磷酸化位点；4 个 O-糖基化位点；1 个前肽裂解预测位点； 该蛋白是一个亲水性不稳定蛋白，无跨膜区，可能参与重要的能量代谢及免疫反应。 结论：1.Hsp16.3 基因克隆入宿主菌中并成功表达。 2. 经过纯化得到纯度较高的目的蛋白，为 Hsp16.3 的进一步研究奠定基础。 3. 生物信息学分析显示该蛋白是一个亲水性不稳定蛋白，无跨膜区，可能参与重要的能量代谢及免 疫反应。 关键词：结核分枝杆菌，Hsp16.3，蛋白表达，纯化，生物信息学 论文类型：A（基础研究） Abstract Objective