利用条件性基因敲除小鼠研究nik在t细胞与trim69在精子发生中的功能-using conditional knockout mice to study the function of nik in t cells and trim 69 in spermatogenesis.docxVIP

北京协和医学院博士研究生学位论文2．T细胞特异性敲除NIK基因不影响B细胞的发育．．233．T细胞特异性敲除NIK基因不影响胸腺细胞的发育．．234．NIK基因直接影响外周T细胞的稳态．．245．NIK基因直接影响调节性T细胞的稳态．．256．NIK基因不是初始T细胞激活所必须的．．267．NIK基因缺失影响体外Thl7细胞的分化278．在体内NIK调节由抗原刺激引起的T细胞分化以及记忆性反应．289．NIK基因缺失影响由抗原刺激引起的效应T细胞增殖．．2910．NIK基因是诱导EAE发病所必须的2911．NIK基因影响体内Thl以及Thl7效应T细胞的产生一3l12．NIK基因缺失会降低体内T细胞对细菌感染的清除32讨{仑。．34小结．．38第二部分：睾丸特异性E3泛素连接酶TRIM69的RING结构域在精子发生过程中的功能研究．．39中文摘要40英文摘要4l前言一42材料与方法461．实验动物462．主要仪器、设备、软件及试剂463．引物的设计与合成464．原位杂交485．小鼠基因组DNA提取486．小鼠基因型PCR鉴定．497．细胞总RNA的提取(T砌zol法)498．逆转录(使用promega试剂盒A3500)．509．Real—time PCR(RT-PCR)。，5010．苏木精(Hematoxylin)和伊红(Eosin)染色(HE染色)．5l 11．TUNEL法检测细胞凋亡(使用碧云天一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒)5211万方数据北京协和医学院博士研究生学位论文12．精子活力检测．5213．转录组测序(RNA-Seq)5214．实验数据处理．52实验结果531．Trim69基因的mRNA在睾丸组织中特异性表达并且主要集中在精子发生过程 中除精原细胞的生精细胞 532．生精细胞特异性敲除RING结构域的Trim69基因小鼠的构建．543．生精细胞中特异性敲除Trim69的RING．finger结构域小鼠精子发生正常一564．TRIM69基因RING．finger结构域的缺失会影响睾丸组织中正常基因的表达．585．Kaplan Meier-plotter数据库分析TRIM69在mRNA表达水平上的癌症术后价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．606．p53基因突变的乳腺癌患者中，TRIM69基因的高表达患者术后生存期明显延 长．．6l讨论．．63小结．．68综述一：基因敲除小鼠研究进展．69综述二：非经典NF．r,B信号通路82独创性声明109博士在读期间发表的论文情况110致谢1 11万方数据北京协和医学院博士研究生学位论文第一部分：NF．F,B．诱导激酶在调节T细胞介导的免疫和自身免疫 应答中的直接功能万方数据北京协和医学院博士研究生学位论文中文摘要NF．出一诱导激酶是非经典NF．v．B信号通路的中心分子，虽然已有很多NIK 如何调节淋巴器官发育与B细胞成熟的研究，但NIK在T细胞中的功能还不完 全清楚并且存在争议。通过使用T细胞条件性NIK基因敲除小鼠，我们发现虽然 NIK不是胸腺细胞发育所必须的，但却对外周淋巴器官中T细胞动态平衡和功能 具有重要作用。T细胞中NIK的缺失会导致效应T细胞和记忆性T细胞比例及数 量降低并且影响T细胞对细菌感染的免疫反应。另外，我们还发现T细胞条件性 NIK基因敲除小鼠具有产生炎性T细胞的缺陷，对一种T细胞依赖的自身性免疫 疾病一实验性变态反应性脑脊髓炎不敏感。我们的研究表明NIK对体内效应T细 胞的产生及T细胞对抗原的记忆能力具有重要功能，并且证明了NIK在T细胞 内的功能可以影响免疫及自身性免疫反应。关键词：NF．KB，NF．v,B．诱导激酶，动物模型，T细胞，免疫及自身性免疫反应2万方数据北京协和医学院博士研究生学位论文Cell intrinsic role of NF—-KB--inducing kinase in regulating Tlll●’●’‘cell-mediated lmmUne and autoimmune resDonsesAbstractNF-r,B inducing kinase(NIK)is a central component of the noncanonical NF-rd3 signaling pathway．Although NIK has been extensively studied for its function in the regulation of lymphoid organ d