高效液相色谱法的应用上海.pptVIP

请将手机和传呼机调至振动档，谢谢您的合作！ 高效液相色谱法的应用讲座 谢沐风 上海市药品检验所化学二室 l???HPLC仪器的介绍，基础知识。 l??HPLC在各项分析技术中应用，及一些主要的技术要求、技术细节，着重讲解方法认证的各要素应如何深入理解和进行试验。并将尽量列举更多的实例，使大家对原理和应用有一个更深的认识和体会。 l??同时，还将讲述在新药申报和审评中，应注意的问题和事项，并就各剂型的注意事项逐一讲解。 l? 有关物质的测定方法如何建立，和如何做到更科学、合理地制订一个产品的质量标准，和今后应如何去完善，修改。 l???我将还介绍以下Excel软件在我们分析工作中的应用。 工作中应注意总结，理论联系实际，重视文献的查询，不要匆匆忙忙地就进行试验，搞清楚原理，做好试验计划、设计好试验后，再有条不紊地进行。试验期间不要怕遇到问题，越是遇到问题，解决问题，提高得越快，如果长时间都没有问题，都“一帆风顺”，那将没有提高! l???? HPLC仪的一般操作 1.????? 几大仪器生产厂商的介绍和使用下来的体会。 包括国内目前可以生产的部件 根据自己工作需要购买某一品牌。 2.????? 流动相的配制和处理（过滤膜） 3.????? 柱子的安装 4.????? 操作顺序 5.????? 平衡时间 6.????? 如有气泡，如何处理。 仪器维修 培养一位同志 （1）分析生化样品、血液制品和手性色谱柱时，最好加一预柱以保护。 （2）配备柱温箱，以保证试验的重现性和降低柱压等 （3）最好能配一电脑和国产软件。不要用积分仪。 （4）压力不稳时，绝大多数情况是有气泡混入。应排除。 （5）试验后色谱柱冲洗。 （6）色谱柱不用、存放时，两头柱塞一定塞住，否则容易挥发干损伤柱子。 （7）建立仪器使用登记本。 1．定义: HPLC——high performance liquid chromatography 2．分析物质的分子量大小——分子量一般在200~1000之间，太大的分子量（如多肽类等）导致脱尾严重，此时可采用其他方法进行分析，如毛细管电泳，凝胶色谱等。 3．分析的特点 适用范围宽：现在决大部分化学类药品皆可采用该仪器分析。 分离效率高：复方分析、辅料干扰时等情况下，更显示其威力。 速度快：一般出峰时间均在30min以内。这里需要强调的是，通常采用流速为1.0ml/min，柱温30~40℃的测定条件。一般含量测定、溶出度可调整为出峰时间快一些，有关物质测定一般调整的慢一些，最好10~15min左右出峰为好。 流速和柱温均可适当改变，以适应测定的需要。如含量测定时，可适当加大流速和提高柱温；柱温降低和流速降低均可对分离效果提高。顺便提级：同样的测定条件，不同公司生产的色谱柱C18柱，出峰时间都有可能相差很大。这十分正常。目前国外已基本采用一根色谱柱对一个产品，特别是一些特殊的柱型，质量标准中均详细注明。国内虽做不到，但可在色谱条件上下工夫，以适应不同的色谱柱型号，即后面即将讲到的方法认证中的系统耐用性。 灵敏度高：可检测物质达10-9g左右，一般最低检测浓度均可达10-1~10-3μg/ml（进样体积10~20μl）。这是紫外测定无法匹敌的。有些浓度非常低的，紫外检测不到或者说紫外无法测定的，应用HPLC法均可得到满意的解决！并可通过使用不同的检测器，测定不同物质，或再提高测定灵敏度。 色谱柱可反复使用：一般保存好，均可达2年以上。 流出的组分容易收集：可用于制备色谱或价格极为昂贵的物质收集。 安全：仅有一些有机溶剂的污染（使用时，流动相口要密封，一者以免挥发，流动相中各组分比例不准，二者防止挥发，污染环境），比气相要安全的多。 还有一个优点，就是成功率较高：一般条件确定好后，均可得满意的结果，这也是与气相、毛细管电泳比最大的优点。 4．分离原理就是利用不同物质间的细微差别，使得在色谱柱上所显现的保留行为有所不同进行分离测定。主要是能够分离。 两个主要参数：(1)柱效用理论板数来表达： (2)分离度：该公式应用时的注意事项，同上式相同。 5，色谱柱类型 C18柱（ODS是其中的一种，主要区别是将未键合的OH基遮盖，而ODS是其商品名）、C8柱、氨基柱、苯基柱、阳（阴）离子交换色谱柱等，这些都是固定相表面键合的极性有机基团不同所至。 不能混用。 由于甲醇的极限波长为210nm左右，故短波长测定时，最好不要采用甲醇，而用乙腈。 样品稀释用溶剂的选择：测定有关