抗淋病ltb-gonorrhea resistant ltb.docx

南华大学学位论文原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使 用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说 明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 作者签名： 年 月 日 南华大学学位论文版权使用授权书 本学位论文是本人在南华大学攻读 （博/硕）士学位期间在导师指导下完成 的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位 的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容， 可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规 定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并 按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中 国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网 络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。 作者签名： 导师签名： 年 月 日 年 月 日 目 录 中文摘要1 英文摘要3 前言6 实验材料9 实验方法11 实验结果26 讨论46 结论51 参考文献52 英文缩略语索引56 文献综述58 发表及及待发表论文65 致谢66 PAGE PAGE 10 抗淋病 LTB-porB 核酸疫苗与重组蛋白疫苗 联合免疫的免疫增强效应研究 硕士研究生： 戴志兵 导 师： 胡四海 教授 中 文 摘 要 目的： 将 LTB-PorB 核酸疫苗和重组蛋白疫苗鼻饲免疫 BALB/c 小鼠，分别分析其免疫 活性，探讨粘膜佐剂 LTB 能否辅佐 PorB 诱导更有效的特异性粘膜免疫，为经粘膜途 径感染病原体的疫苗研制进行有益探索；采用抗淋病 LTB-PorB 核酸疫苗与重组蛋白 疫苗联合（核酸初免-蛋白加强免疫）鼻饲免疫雌性 BALB/c 小鼠，探讨其能否增强 特异性体液免疫和细胞免疫应答水平，为研制高效抗淋病疫苗提供实验依据。 方法： 1. 对本课题组保存的真核表达重组质粒 pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)/porB 和 pcDNA3.1(-)/ltB-porB 进行鉴定后，大量制备并纯化；鼻饲免疫雌性 BALB/c 小鼠， 检测体液免疫和细胞免疫水平。 2. 将 本 课 题 组 保 存 的 原 核 表 达 重 组 质 粒 pET-30a/ltB 、 pET-30a/porB 和 pET-30a/ltB-porB 在大肠杆菌 BL21 中诱导表达重组蛋白；鼻饲途径免疫雌性 BALB/c 小鼠，检测体液免疫和细胞免疫水平。 3. 大量制备 LTB-PorB 核酸疫苗及重组蛋白疫苗；通过鼻饲途径将核酸疫苗和重 组蛋白疫苗采用核酸初免-蛋白加强（DNA prime-protein boost）联合免疫雌性 BALB/c 小鼠，检测体液免疫和细胞免疫应答水平。 结果： 1. LTB-PorB 核酸疫苗（pcDNA3.1(-)/ltB-porB）免疫组小鼠生殖道黏膜产生的 PorB 特异性 sIgA 和血清 IgG 水平随免疫时间呈上升趋势，第 8 w sIgA A450 值达 0.470±0.088 ， 明 显 高 于 对 照 组 （P0.01 ）， 效 价 达 1 ： 320 ； 第 8 w IgG A450 值 为 0.528±0.106，明显高于 pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和 PBS 对照组（P0.01），效 价达 1：1280，但与 pcDNA3.1(-)/porB 对照组（A450：0.511±0.094）无显著性差异 （P0.05）。pcDNA3.1(-)/ltB-porB 组脾淋巴细胞刺激指数和脾淋巴细胞诱生的 IFN-γ、 IL-4 水平均明显高于 pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和 PBS 对照组（P0.05）。 2. LTB-PorB 重组蛋白疫苗免疫组小鼠生殖道黏膜产生的 PorB 特异性 sIgA 水平 随免疫时间呈上升趋势，第 6 w A450 值达 0.663±0.095，明显高于对照组（P0.01）， 效价达 1：1280；血清中 PorB 特异性 IgG 水平在第 4 w 达最高，A450 值为 0.598±0.062， 明显高于 LTB 和蛋白溶解液（Solution Buffer）对照组（P0.01），效价达 1：5120， 但与 PorB 对照组（A450