雷帕霉素通过调节自噬—溶酶体系统功能改善apoe-rapamycin improves apoe by regulating the function of autophagy - lysosomal system.docx

目录英文缩略词表………………………………………………………………………2中文摘要……………………………………………………………………………3英文摘要……………………………………………………………………………5引言…………………………………………………………………………………7材料和方法…………………………………………………………………………10结果…………………………………………………………………………………18讨论…………………………………………………………………………………29结论…………………………………………………………………………………34参考文献……………………………………………………………………………35综述…………………………………………………………………………………39致谢…………………………………………………………………………………45个人简介……………………………………………………………………………461英文缩略词表AβADapoEAPPCTF-ββ‐amyloidAlzheimer’sdiseaseapolipoproteinEamyloidprecursorproteinC-terminalfragment‐ββ‐淀粉样蛋白阿尔茨海默病人载脂蛋白E淀粉样前体蛋白C末端片段‐βCTDDABDMSODSELISACathepsinDdiaminobenzidinedimathylsulfoxideDonkeyserumEnzymelinkimmunosorbentassay组织蛋白酶D二氨基联苯胺二甲亚砜驴血清酶联免疫吸附测定FADGSLAMP-1familialAlzheimer’sdiseasegoatserumlysosomeassociatedmembraneprotein1家族遗传性AD羊血清溶酶体膜蛋白LC-3microtubule-associatedproteinlight微管相关蛋白轻链3chain3mTORmammaliantargetofrapamycin哺乳动物雷帕霉素靶蛋白NFTsPBSRAPAneurofibrillarytanglesphosphatebufferedsalineRapamycin神经原纤维缠结磷酸盐缓冲液雷帕霉素SDSSPFTauTBS5XFADsodiumdodecylsulfatspecialpathogenfreeTauproteinTris-bufferedsalineTrisFiveFADmutationstransgenicmice十二烷基硫酸钠特定病原体Tau蛋白盐缓冲液5个家族性AD基因突变的转基因小鼠2雷帕霉素通过调节自噬-溶酶体系统功能改善apoE-5XFAD转基因小鼠学习记忆障碍中文摘要【目的】β淀粉样蛋白（β‐amyloid，Aβ）代谢异常是阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease，AD）发病机制的重要环节。自噬在AD发病机制中可能起双重作用,既可加速疾病的进展，但在某些条件下又起保护作用,可能通过调节Aβ产生和降解的动态平衡而影响疾病的进展。ApoE4是AD重要的危险因素，ApoE可能通过其特定的亚型调节Aβ诱导的神经毒性作用，但是关于自噬和ApoE4参与AD发病的具体机制仍不明确。本研究以表达人ApoE4、ApoE3、ApoE2和ApoE基因敲除的APP/PS1AD转基因动物为模型（apoE-5XFAD转基因小鼠），应用Rapamycin诱导激活自噬-溶酶体系统，观察ApoE不同遗传背景和年龄下脑内自噬-溶酶体系统功能、神经病理学和行为学差异。【方法】SPF级1.5月龄、3月龄、6月龄雄性apoE-5XFAD转基因小鼠随机分为溶媒对照组、雷帕霉素处理组（1mg/Kg），每组8～11只，灌胃给药，每日1次，共30天。采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力。电镜观察海马CA1区自噬-溶酶体的超微结构及数量。免疫组化和ELISA检测脑内Aβ水平。免疫荧光观察脑内自噬体、溶酶体以及溶酶体酶的数量。Westernblotting检测海马自噬体标记物LC-3、溶酶体酶CathepsinD、自噬信号通路中pmTOR/mTOR和beclin-1的表达。【结果】雷帕霉素可不同程度改善apoE/5XFAD转基因小鼠视空间学习记忆能力，以6月龄apoE3/5XFAD、apoE4/5XFAD组改善最为明显。雷帕霉素可减少不同月龄、不同亚型apoE/5XFAD转基因小鼠海马自噬小体内电子致密物的沉积。雷帕霉素可抑制pmTOR的表达，增加自噬体标记物LC-3和组织蛋白酶D（CathepsinD）的表达，调节自噬溶酶体系统的功能。雷帕霉素可减少apoE/5XFAD转基因小鼠海马内不溶性Aβ的数量，尤以6月龄apoE4/5XFAD组减少最为明显。【