利拉鲁肽对肝脏糖原合成的影响及其机制的分析-influence of liraglutide on hepatic glycogen synthesis and its mechanism analysis.docxVIP

利拉鲁肽对肝脏糖原合成的影响及其机制的分析-influence of liraglutide on hepatic glycogen synthesis and its mechanism analysis.docx

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利拉鲁肽对肝脏糖原合成的影响及其机制的分析-influence of liraglutide on hepatic glycogen synthesis and its mechanism analysis

上海交通大学医学院硕士学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密i(请在以上方框内打.J)学叫她对日期:山!千年10月2日日期:/.在/以日利拉鲁肽对肝脏糖原合成的影响及其机制的研究摘要糖尿病已经成为全球威胁人类健康最常见的慢性病之一。2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)在糖尿病患者中占90%以上,其发病机制除胰岛β细胞功能减退及胰岛素抵抗(insulinresistance,IR)两个基本环节外,还包括胰腺α细胞功能异常等多个因素。传统的药物治疗往往因仅局限于糖尿病发病的某一环节而疗效受限。胰高糖素样肽-1(glucagon-likepeptide1,GLP-1)具有葡萄糖依赖的促胰岛素分泌及抑制胰高糖素分泌的作用,既能改善β细胞功能,又有多重胰腺外的作用,能全面作用于T2DM及其并发症发病的各个环节。近年来基于GLP-1的治疗已成为T2DM治疗的合理靶点。目前GLP-1在胰腺内的作用机制研究比较充分,但其在胰腺外尤其是肝脏内作用的分子机制尚不明确。现有研究显示GLP-1在肝脏内以促进糖原合成为主,但具体分子机制尚无定论。本课题将通过GLP-1的长效受体激动剂利拉鲁肽对肝脏糖原合成的影响及机制的研究,进一步探讨GLP-1及其受体激动剂在肝脏内的作用及分子机制,为GLP-1受体激动剂在T2DM等代谢性疾病治疗中的应用提供理论依据。I一、利拉鲁肽对肥胖T2DM患者β细胞功能及胰岛素敏感性的影响目的:探讨利拉鲁肽在肥胖T2DM患者中对?细胞功能及胰岛素敏感性的影响。方法:新诊断和口服降糖药物效果欠佳的肥胖T2DM患者,接受二甲双胍联合利拉鲁肽和门冬胰岛素30治疗共12周。测定所有对象治疗前后的体重(BW)、体重指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2h-PG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、糖化白蛋白(GA)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血清空腹C肽(FCP)、餐后2hC肽(2h-CP)等指标,并计算?细胞功能指数(HOMA-β)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。比较各组治疗前后及两组间各项指标变化情况。结果:利拉鲁肽组治疗12周后BW及BMI均较治疗前明显下降,与门冬胰岛素30组相比存在显著性差异。两组治疗后FPG、2h-PG、HbA1c和GA均较治疗前明显下降。利拉鲁肽组治疗后FCP、2h-CP和HOMA-IR较治疗前明显下降,HOMA-?明显上升;而门冬胰岛素30组治疗后FCP和2h-CP较治疗前明显上升,HOMA-?也明显上升。两组治疗后HOMA-IR下降存在显著性差异。利拉鲁肽组治疗后TC、TG及LDL-C较治疗前明显下降;而门冬胰岛素30组治疗后TC和LDL-C较治疗前明显下降。结论:肥胖T2DM患者二甲双胍联合利拉鲁肽与门冬胰岛素30治疗均能有效控制血糖,改善?细胞功能,且作用两者无显著差异。但在控制体重及改善IR方面利拉鲁肽优于门冬胰岛素30,可同时改善?II细胞功能和IR。提示利拉鲁肽不仅存在胰腺内的生物学作用,还存在胰腺外的生物学效应。二、利拉鲁肽对HepG2细胞糖原合成信号通路的影响目的:探讨利拉鲁肽在HepG2细胞中对糖原合成信号通路的影响。方法:以不同浓度利拉鲁肽(0nmol/L、0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L)对HepG2细胞进行处理,12及24h后分别收集细胞,观察处理前后细胞的形态。处理后提取细胞总mRNA并抽提细胞总蛋白。实时荧光定量PCR检测糖原合成信号通路中Akt-2及GSK3βmRNA的表达水平。Westernblot检测糖原合成信号通路中Akt和GSK3β总蛋白及pAkt(Ser473)和pGSK3β(Ser9)磷酸化蛋白的水平。结果:HepG2细胞内,利拉鲁肽处理12小时及24小后均可上调Akt-2mRNA的表达,上调pAkt(Ser473)、Akt、pGSK3β(Ser9)蛋白水平,下调GSK3βmRNA的表达及蛋白水平,浓度为1nmol/L时最明显,细胞形态无明显变化。结论:在肝细胞内,利拉鲁肽可作用于PI3K/Akt/GSK3信号转导通路,在HepG2细胞内最佳作用浓度为1nmol/L,12小时已发挥作用,可持续24小时。三、利拉鲁肽对IR及T2DM大鼠肝脏糖原合成的影响及作用机制目的:探讨利拉鲁肽对IR及T2DM大

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