利用猪制作动静脉畸形动物模型的研究进展-research progress of animal model of arteriovenous malformation using pigs.docxVIP

微血管网为畸形团，经微血管网‐海绵窦瘘引流到基底窦和颈内静脉的AVMs模型。该模型建立方法简单,可用于模拟血管内治疗、检测栓塞剂的有效性和安全性,也可用于放射介入医师进行血管内治疗的训练。但是该模型对动物创伤较大，并且穿刺所致的微血管网一海绵窦瘘会在1周内自发闭塞，常用作急性期的实验研究。同年9月，Massoud等17采用外科手术的方法，将猪的右颈总动脉与右颈外静脉行动静脉侧侧吻合，并结扎右颈总动脉吻合口的近心端和右颈外静脉吻合口的远心端，手术吻合形成右侧颈动脉‐颈外静脉瘘。并结合血管内技术，通过在右咽升动脉肌支和右枕动脉的起点处放置弹簧圈或经微导丝将其闭塞，阻塞同侧流向瘘的颈部动脉。模型制作成功后，血液自左侧咽升动脉（供血动脉）通过双侧RMB(畸形血管团),快速回流到右侧咽升动脉和颈总动脉(引流静脉),经瘘口流向颈内静脉。由于猪的颈部血管口径大，易于操作，并且可以长期保持。可用于研究AVMs的发病机制、血流动力学及组织学特征变化,还可进行AVMs治疗的研究和训练。无论是体外模型、计算机理论模型，还是以往的动物模型，均存在着明显不足。因此，建立组织学和血流动力学更接近临床患者的动物模型，并以此为基础进行相关研究，对于认识动静脉畸形的血管构筑学特征、病理生理和发病机制，探索AVMs的发生发展过程及治疗方法具有重要意义。本实验基于Massoud等及国内学者建立动物模型的经验，通过改进吻合方法，力求建立一种更类似于人AVMs的简单、经济的AVMs实验动物模型。1.材料与方法材料实验动物健康家猪9只，雌雄不限，由上海南汇特种动物养殖场提供，购回后由上海交通大学医学院附属第九人民医院动物房饲养。实验动物纳入标准：体重15‐25Kg，营养状况良好，无全身系统性疾病，动作敏捷。仪器与设备常规手术器械、显微吻合器械、穿刺针、造影导管、导丝、数字减影血管造影仪(INNOVA3100，美国GE公司)、三维螺旋CT（Brilliance64，荷兰Philips公司）。方法1.2.1动物麻醉及消毒实验动物术前12h禁食水，腹腔注射盐酸氯胺酮（2mg／kg）诱导麻醉。然后开通耳缘静脉通道，注射硫酸阿托品(0.2mg／Kg)，并行气管插管。然后以1％盐酸氯胺酮葡萄糖溶液静脉滴注维持动物在满意的麻醉状态。颈部及右下肢腹股沟区备皮，碘伏消毒，铺巾。手术期间进行呼吸、脉搏、心电图和血氧饱和度监测。1.2.2血管吻合法建立动静脉畸形模型图1.术中血管显微吻合图Fig1.AphotoofAVMSaftermicrosurgeryofanend-to-endanastomosis端-端吻合左颈总动脉（小箭头）与颈内静脉（大箭头）。动脉夹所示为吻合口处。实验动物猪共9头。随机选取1头家猪直接注射戊巴比妥钠(100mg/kg)处死，并开颅取颅底奇网制作组织标本作为组织学观察的空白对照组。实验组8头家猪，编号为A~H。8头猪均采用左侧气管旁纵切口，切口长6～10cm。切开皮肤，皮下筋膜，暴露胸锁乳突肌。在胸锁乳突肌外侧表面分离出颈外静脉备用。拉钩拉开胸锁乳突肌后钝性分离即可充分暴露颈总动脉和颈内静脉。分别游离出一段颈总动脉及颈内静脉。根据与颈总动脉管径匹配情况，选择颈内静脉或颈外静脉进行显微吻合。使用动脉夹及静脉夹分别暂时夹闭颈总动脉远心端及颈内/外静脉近心端，结扎颈总动脉近心端以及颈内/外静脉远心端。应用2%利多卡因冲洗端口消除血管痉挛，然后选用8‐0无损伤带针尼龙缝合线吻合颈总动脉的远心端与颈内静脉的近心端(见图1)。松开血管夹，冲洗吻合口并行静脉通畅实验检查及观察有无漏血。如有漏血缝合漏口，然后分层关闭创口。术后1周内按8000U/kg体重应用青霉素以预防感染。1.2.2影像学检查及组织标本制作术前1周随机选取3头家猪行咽升动脉血管造影作为血管造影的空白对照。吻合术后即刻经股动脉行右侧咽升动脉造影，评价实验动物模型的血管构筑情况及血流动力学特征。由于猪股动脉位置深在，难以直接穿刺，应先手术切开皮肤、钝性分离、暴露猪右侧股动脉。然后解剖游离股动脉，采用Seldinger技术穿刺股动脉，送入4F导管鞘建立血管通道。在路径图引导下将4F椎动脉导管引入右侧咽升动脉造影，并行三维计算机断层扫描血管造影（three‐dimensionalcomputedtomographyangiography，3D‐CTA)检查。动静脉畸形实验动物模型建立后1周行第2次动脉造影检查及3D‐CTA检查。吻合术后1个月行第3次血管造影检查及3D‐CTA检查。然后将动物全部处死、取颅底奇网制作组织标本。取颅底奇网的同时，还取颈动静脉吻合口处血管。标本经10％的甲醛固定72小时后，常规脱水、石蜡包埋、切片、HE染色。然后用光学显微镜放大40、100、400倍观察。2.结果2.1一般情况实验组8头家猪