餐饮食品中水溶性色素的检测-HPLC法测定编制-贵州卫生计生委.DOC

《餐饮食品中水溶性色素的检测 液相色谱法》 地方标准编制说明 一、标准制定背景 我所从2012年来承担了我省每年的餐饮服务食品风险监测和监督抽查工作，发现餐饮业有采用染色手段制作主食的现象。我们起草的标准主要针对餐饮食品中的粗粮馒头、蔬菜面条、鸡蛋面条等有色食品，目前很多这类食品不是商家声称的粗粮、蔬菜或鸡蛋食品，而是通过染色而得的食品，这是欺骗消费者的行为，应预以有效的监管，现在没有合法的标准，制约了这项工作。我们的立项的内容包括最常用的一些合成色素，常被用来染色伪造粗粮馒头、蔬菜面条和鸡蛋面条等。目前国家标准中没有涉及到有些色素的检测，例如：食用绿S、喹啉黄、专利蓝等。在实际检测工作中发现现有国家标准针对不同色素采用不同的检测方法，检测效率低，前处理较繁琐，且容易出现假阳性。因此传统的色谱法并不能有效地对餐饮服务食品中水溶性色素进行监控。本标准拟建立高效液相色谱-DAD检测器法多波长同时检测餐饮食品中多种水溶性色素，该检测手段拥有灵敏度高、特异性好等优点，通过同时检测改善目前检测工作繁琐低效的现状，大大提高工作效率，减少误判，准确定量。 2014年贵州省卫生厅组织了食品安全地方标准审评委员会专家组召开了评审会议，通过了《餐饮食品中水溶性色素的检测 液相色谱法》地方标准的立项，项目批准文号为：黔卫计办函【2015】94号。 二、主要工作过程 （一）标准起草小组的成立 《餐饮食品中水溶性色素的检测方法 液相色谱法》地方标准任务下达后，我所于2015年10月成立了以贵州省食品药品检验所、贵州分析测试研究院、贵州省流通环节食品安全检测中心、贵州省产品质量监督检验院等单位组成的标准起草小组，对职责进行分工，确定工作计划，由贵州省食品药品检验所食品检测室负责起草、贵州分析测试研究院、贵州省流通环节食品安全检测中心、贵州省产品质量监督检验院负责验证。 （二）收集资料及市场调研 标准起草小组按标准的编制计划，组织技术人员对食品相关产品中的色素测定方法 液相色谱法进行了方法资料查找收集，了解了目前我省餐饮食品中非法染色情况，主要研究了餐饮食品中可能非法染色的色素有柠檬黄、日落黄、喹啉黄，食用绿S，亮绿，苋菜红，胭脂红，诱惑红，酸性红，赤藓红，亮蓝，靛蓝，专利蓝。在实验方案设计的时候，充分考虑不同色素的性质，采用有效的提取、净化方法，灵敏度高的检测波长，并对所有的色素做了回收率试验。 （三）试验形成标准草案 根据计划，贵州省食品药品检验所组织了技术骨干进行了多次的试验，2014年8月-2015年5月经过几个月实验室的条件摸索，确定了最终方法的色谱条件和样品前处理方法，进行了方法学的验证工作。 1色谱条件的确定：因同时对多种色素化合物进行检测，故采用了梯度洗脱保证多种化合物能够灵敏快速的检出，详见后附方法学验证资料。采用缓冲盐水溶液后保留增强保留时间稳定，峰形尖锐重现性好。尽量采用易得、长效、价廉的柱子，故采用反相C-18柱分离，且流动相的洗脱能力不宜过强，最终我们选择了乙酸铵水溶液-甲醇流动相系统，通过优化梯度洗脱程序，最终使多种化合物在较短的时间内完成分离。 2 检测波长的确定：参考GB/T 5009.35-2003，采用的是254nm的测定波长，这些色素有吸收，但灵敏度低，而且附近杂质较多，造成分离不完全，影响测定结果准确性。后参考SN/T 1743-2006，采用不同的检测波长，我们通过实验针对不同的色素找到最佳的检测波长，使灵敏度得到较大提高，分辨率提高， 3 样品前处理方法的确定:首先参照了GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》的方法对馒头中的色素进行测定，结果发现回收率只有30%左右，可能是吸附和解吸附不完全造成的。后来采用了取含氨水的乙醇直接提取、物理净化，回收率良好，操作简单方便。 确定了方法后，我们进行了方法验证，精确量取适量的几种色素标准工作液用水稀释成浓度系列标准工作溶液，供液相色谱检测。将测定相应的信号响应值，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算出回归方程和相应系数。检出限（LOD）采用向空白样品中逐级降低加标浓度的方法来确定。以3倍信噪比（S/N=3）对应的目标物浓度作为检出限（LOD）。 在模拟的粗粮样品中进行添加回收试验，在优化的色谱条件下分析。在低、中、高三种添加水平下几种色素的平均回收率在80%-120%之间，相对标准偏差（RSD,n=6）在1.3%-10%之间。方法的回收率和精密度符合GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范 食品理化检测》对回收率和精密度的要求。 2. 实验室间验证结果 2016年6月-2016年7月试制了阳性样品分别送到贵州分析测试研究院、贵州省流通环节食品安全检测中心、贵州省产品质量监督检验院三家实验室进行了比对，统计比对结果