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萝卜与大头菜属间杂种胚离体培养 　　摘 要：用萝卜雄性不育系DH303A作母本，以大头菜为父本进行属间远缘杂交，杂交后代的初期结荚率为64％~88％，横径第7天停止增加，荚长第8天停止生长，授粉以后第7天开始败育，而且越往后败育得越快。在杂种胚发育后5～8 d进行胚抢救，用生芽培养基（1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.5%活性炭）和生根培养基（1/2 MS+ 　　0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.5%活性炭）进行离体培养，能成功获得幼苗。 　　关键词：萝卜；大头菜；远缘杂交；胚抢救；离体培养 　　 　　 萝卜（Raphanus sativus L.）是我国栽培的主要蔬菜作物之一，十字花科萝卜属，一、二年生草本植物。原产我国，各地均有栽培，品种极多，常见有白皮萝卜、红皮萝卜、青皮萝卜等。鲜食生食均可，种子含油42％，可用于制肥皂或作润滑油。种子、鲜根、叶均可入药，可下气消积，生萝卜含淀粉酶，能助消化[1]。大头菜（Brassica juncea Coss. var. napiformmis Pal et. Bols）是芥菜的一个变种，为根用芥菜，是十字花科芸薹属二年生草本植物。其产品器官为肉质根，质地紧密、水分少、纤维多，肉质根锥形，肉白色，肉质坚实，有强烈的芥辣味，具有宜肺豁痰、开胃理气的作用。芥菜含有丰富的维生素和大量的微量元素、糖类、蛋白质等，供食部分为肥大的肉质根[2]。萝卜和大头菜均为根用蔬菜，但二者的风味不同。到目前为止，还没有关于二者远缘杂交研究方面的报道。为此，本试验将两种材料进行属间杂交，初步研究杂交亲和性的表现，以及对杂种胚抢救培养方法进行探讨。 　　1 材料与方法 　　1．1 试验材料 　　 以萝卜雄性不育系DH303A为母本（2n=18），大头菜作为父本（2n=18），试验材料种植于湖北省农业科学院蔬菜科技研究中心的试验基地。 　　1．2 试验方法 　　 试验在湖北省农科院蔬菜科技中心进行。 　　 ①播种 大头菜和萝卜种子播种在试验大棚里，常规田间管理。 　　 ②套袋、挂牌 萝卜和大头菜抽薹后套袋，如果套袋之前已有开放的花，要将花摘掉。萝卜雄性不育系每个单株单独套袋，挂牌编号标记，共10个单株，所有的数据取10个单株的平均值；大头菜不分单株，混合给萝卜授粉。 　　 ???授粉 套袋以后，萝卜与大头菜开花时，进行人工授粉。授粉一般在早上10：00和下午15：00进行。授粉的方法：a.在授粉之前首先用水将手洗干净，然后再用酒精消毒。b.打开纱网袋，摘下已经盛开的大头菜的花朵，摘完以后立即将纱袋封好。c.再打开萝卜植株的纱网袋，将大头菜的花粉授到萝卜的柱头上。为了增加花粉与柱头的亲和性，试验采肖成汉[3]的重复授粉法，即在第1次授粉后的第2 天上午再授粉1次），对克服属间杂交不亲和，提高结籽率效果较好。 　　 按以上方法连续授粉7 d，并注意观察花粉与柱头的亲和性。统计授粉花朵数、初期结荚数，计算初期结荚率， 初期结荚率（%）=（初期得到的荚果数/授粉花朵数）×100%。 　　 ④胚胎抢救 胚胎抢救的常规方法有3种：子房培养、胚珠培养、胚培养[4]。本试验采用的是第2种方法――胚珠培养。 　　 在试验田取授粉后第3~9 天的荚果，用小刀把果柄去掉。将荚果先用无菌水冲洗一遍，然后用70%的酒精消毒30 s，再用0.1%升汞消毒8~10 min，最后用无菌水清洗3遍，每遍清洗3 min。将消毒好的荚果放到已经灭菌的带有滤纸的培养皿中，把荚果上的水分吸干，然后小心地用小刀把胚珠从荚果里剥出来，接种到装有生芽培养基（表1）的培养皿上，操作时要注意无菌、以免污染，一般一个培养皿上接种4~5个胚珠。接种完以后用封口膜把培养皿封好，放到培养箱中培养，培养条件是25℃，光照 　　16 h/d，光照强度2 000 lx， 培养30~60 d。观察胚珠在培养基上的生长情况，做好记载。将已经长出的子叶苗转接到生根培养基（表1）上，获得试管苗。 　　 胚胎抢救期间，a.测量荚纵径和横径； 取荚果之前对每天授粉以后荚果的发育情况进行记载，测量荚长、荚的横径。b.统计结荚率。c.观察并统计杂种胚珠培养的出苗率；通过胚珠培养的结果确定萝卜与大头菜远缘杂交胚抢救的最佳时期。 　　2 结果与分析 　　2.1 萝卜与大头菜属间杂交的结荚率 　　 由表2可知，杂交后的初期结荚率为64％~88％，平均初期结荚率为74％。 　　2.2 萝卜与大头菜远缘杂交形成荚果的生长 　　 从表3可以看出，授粉以后荚果便开始生长，到第8天荚长停止增加，而横径第7天停止生长。而且此时很多荚外观已变黄，胚已经开始败育。因此萝卜与大头菜杂交胚的胚抢救最好是在荚停止