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猪旋毛虫病临床检疫方法探析 CHINESEJOURNALOFANIMALQUARANTINE2004,21(11)—.34—. 文章编号:1005—944X(2004)011—0034—02 方友平郭玉风杨勇敏魏德先(湖北省十堰市动物检疫站442000) 旋毛虫病是由毛首目,毛形科 的毛形线虫侵染所引起.成虫寄生 于肠管,幼虫寄生于横纹肌.人,猪, 猫,狗,鼠等都可感染.人旋毛虫病 可致人死亡,感染源为摄食生的或 未煮熟的含旋毛虫包囊的肉品.对 旋毛虫检验的方法主要有目检和镜 检法,集样消化法,酶联免疫吸附试 验,间接血凝试验和免疫荧光抗体 技术等,我们在实践中要不断地改 进,以寻求一种简便,快速而又准确 性高的旋毛虫临床检验方法. 1镜检法 目前对旋毛虫病的检疫主要还 是采用宰后压片镜检法,即目检和 镜检相结合的方法. 1.1采样.取胴体两侧的横膈膜肌 脚部各采样一块,记为一份肉样,其 重量不少于30～50g,与胴体编成 相同号码. 1-2目检和镜检.撕去膈肌肌膜, 仔细检查表面有无半透明露珠状, 乳白色或灰白色针尖大小点状物, 然后用剪刀顺肌纤维方向,剪取l2 粒米粒大肉样均匀的放于夹压玻片 上,在低倍显微镜下观察.从压片 的一端向另一端逐个视野检视,仔 细观察. 2集样消化法集样消化法也是 旋毛虫宰后检疫的一种方法. 2.1采样.按流水线上胴体编号顺 序,以5～l0头猪为一组,每头采取 膈肌数克分别放在序号相同的采样 盘或取样袋内. 2.2捣碎肉样.每头随机取2g,每 组共取l0～20g,加入约100～200 ml0.1～0.4%胃蛋白酶溶液,捣碎 至肉样成絮状并混悬于溶液为止. 2.3消化,过筛.将捣碎液倒入锥 形瓶中,再用等量胃蛋白酶溶液冲 洗容器,洗液注入锥形瓶中,于200 rnl消化液中加入5%盐酸溶液7rnl 左右,中速搅拌,消化2～5min.然 后用粗筛过滤后再用细筛过滤,滤 液收集于另一大烧杯中. 2.4沉淀过滤,分装,镜检.待滤液 沉降数分钟后取上清液再过滤振 荡,使虫体下沉.并迅速地将沉淀物 放于底部划分为若干个方格的培养 皿内.用低倍镜按皿底划分的方格, 分区逐个检查有无旋毛虫. 3酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验是当前应用 最广,发展最快的一项新技术.过程 是将抗原或抗体吸附固相载体,在 载体上进行免疫酶染色,底物显色 后用肉眼或分光光度计判断结果. 3.1采样.按常规采血分离血清. 3.2抗原包被,洗涤.将抗原按说 明书稀释后,加入微量反应板的各 孔中,每孔100L.放湿盒置培养箱 中37cc作用2h.然后用洗涤液洗涤 3次,每次3min. 3.3加被检血清.用洗涤液将被检 血清作l:80稀释,每份作两孔,每 孔滴加100L,同时设阳性,阴性对 照.在湿盒中37cc作用30min后用 洗涤液洗涤3次,每次3min. 3.4加酶标记抗体,加底物.每孔 加入按说明书稀释的酶标记抗体 100L,37cc湿盒作用30min,然后 同上法洗涤.每孔加底物溶液100 L,37cc湿盒避光作用15min. 3.5终止反应,结果判定.每孔加 终止剂50L.根据反应颜色的深浅 先用肉眼判定. 3.6吸光度测定.在酶标测定仪上 读取各孔于490Illa吸收波长的吸 光度,凡被检血清的吸光度高于标 准阴性血清平均吸光度二倍以上, 即判阳性反应. 4间接血凝试验 在间接血凝试验中,以动物的 红细胞作为载体颗粒,这不仅因红 细胞表面几乎能吸附任何抗原并且 用致敏红细胞检测抗体时,其敏感 性高,能测出极微量的抗体. 4.1常规方法采血并分离血清. 4.2测定抗原滴度,并稀释抗原. 4.3用微量移液器向滴定板每孔加 50L稀释抗原,最后二孔可作阳 性,空白对照.然后于第l孔滴加待 检血清50L,用微量移液器作倍比 稀释,最后一滴弃去,阳性对照加阳 性血清,空白对照不加血清,之后待 其反应30rain后再滴加致敏红细胞, 将反应板置微型振荡器上振荡混合l min.取出置室温中约l～2h,待对照 孔红细胞完全沉降后判定结果. 5对比试验 集样消化法比较繁琐,荧光抗 体技术制备程序复杂.这两种方法 在屠宰线上不可能推广,因此我们 在十堰市某定点屠宰场只做了间 接血凝试验,酶联免疫吸咐试验, 和目检,镜检法的对比试验.具体 做法是,对当天进场猪编号采血, 经间接血凝试验和酶联免疫吸咐 试验为阳性的做上标记,弱阳性的 另作一种标记(阳性为感染旋毛虫 强度高,弱阳性为感染旋毛虫强度 低或炎性反应轻微),宰后再针对 性地对阳性和弱阳性者用目检和 镜检法进行检验,对比其结果是否 一 致(阳性:间接血凝试验抗体为 4个滴度以上,酶联免疫吸咐试验 肉眼观察颜色比阴性对照颜色明 一 35一随输技煮.中国动物检疫2004年第2l卷第ll期 显深并且