《医学微生物学精品教学》第18章 病毒感染的检查方法与防治原则.pptVIP

病毒感染的实验室诊断与防治原则 一、标本的采集与送检 原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清 二、病毒形态学鉴定 电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：包涵体检测 荧光显微镜：荧光抗体测病毒抗原 三、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation） 1.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒 2.鸡胚培养 采用孵化9～14天的鸡胚 绒毛尿囊膜 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒的初次分离 卵黄囊 嗜神经病毒 3.病毒的细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell） 细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line） 特点：①对多种病毒敏感 ②生长能力有限, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒 1．病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） ①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； ②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； ③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 血凝试验(hemagglutinin test, HA) 原理 病毒表面血凝素与鸡红细胞表面糖蛋白受体发生结合而发生凝集 检测病毒的存在，滴定病毒的血凝效价，大致估计病毒颗粒的数量 (1个血凝单位＝106病毒颗粒) (4)细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH变化减慢 3.病毒血清学鉴定 用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验--—正粘病毒型与亚型鉴定 病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验） 病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集 （血凝抑制试验） 四、病毒抗原检测 用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型 免疫荧光（IF） 放射性免疫标记（RIA） 酶联免疫吸附（ELISA） 五、病毒核酸鉴定 抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序 六、病毒感染的血清学诊断 测定采集血清标本中IgG或IgM抗体、双份血清 应用： ①采取标本分离病毒为时已晚 ②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒 ③为证实所分离的病毒的临床意义 ④进行血清流行病学调查等 1.中和试验（neutralizing test） 病毒＋中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长 应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用 2.血凝抑制试验(hemagglutinin inhibition test, HI) 原理 特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。 检测血清中是否存在抗体及抗体的效价 对病毒进行分型 3.补体结合试验 （complement fixation test） 用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。 第二节 病毒感染的特异性预防 微生物及其代谢产物 生物制品 动物免疫血清 （biological products） 免疫细胞 细胞因子 防治和诊断感染性疾病 一、人工主动免疫常用生物制品 灭活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（liv