两个马铃薯y病毒分离物全基因组序列测定及抗病毒dsrna表达载体构建-sequencing of the whole genome of two potato y virus isolates and construction of anti-virus dsrna expression vector.docxVIP

1. 前言1.1 植物病毒及其危害植物病毒病有植物“癌症”之称，每年因病毒病对粮食生产、园艺作物、经济作物 等所造成的经济损失约数百亿元。目前，植物病毒的种类越来越多，传播也越来越容易， 对各种农作物及其他植物在产量和品质上造成的损失也越来越严重，有的甚至产生毁灭 性的破坏（Lucas等，1975）。由植物病毒引起的病害在数量上占植物病害的第二位，仅 次于真菌性病害。玉米是世界上最大的粮食作物，SCMV 感染所致的玉米矮花叶病（Maize dwarf mosaic，MDM）在我国北方大面积发生，限制我国玉米持续高产稳产，是玉米生产上 面临的突出问题（吴建宇等，1999；Jiang 等，2002）。烟草是重要的经济作物，目前世界上已报道的侵染烟草的病毒达47种，中国有17种， PVY、CMV、TMV是我国烟草上分布广、危害严重的病害，田间病毒病多混合发生， 往往给烟草生产造成严重损失。病害流行的年份，由病毒病造成的烟叶产量损失可达 30%～50%，个别地区甚至绝产（陈瑞泰等，1997；李义强等，2004）。1.2 植物病毒的分类在很长一段时间内，植物病毒的分类系统是以组（group）为分类单元。在 1995 年 国际病毒分类委员会（ICTV）发表的第六次报告中，首次采用与其它病毒相一致的科（family）和属（genus）的分类系统（Murphy 等，1995；张成良等，1997）。2005 年 7 月，ICTV 发表了关于病毒分类的第八次报告，将目前 ICTV 所承认的 5450 多个病毒划 分为 3 个目，73 个科，11 个亚科，289 个属，1950 多个种。该报告共收录 1569 个植物 病毒，分属于 18 个科，81 个属（Fauquet 等，2005）。1.3 马铃薯 Y 病毒属马铃薯 Y 病毒属（Potyvirus）是植物病毒中代表属，包括大约 200 个种，几乎占到 已知植物病毒的 20％，代表种为 PVY，SCMV 也属于该属。该属中的许多病毒是危害 农作物、牧草、果树及观赏植物的重要病毒，造成了严重的经济损失（Ward 等，1991）。 1.3.1 马铃薯 Y 病毒属病毒的生物学特性 马铃薯 Y 病毒属病毒的形态特性马铃薯 Y 病毒属的病毒粒体弯曲线状，无包膜，长约 680-900 nm，直径 11-15 nm，螺旋对称结构，螺距约 3.4 nm。该属病毒外壳蛋白由一种多肽组成，分子量为 30-47 kDa，占整个病毒粒体 95%的重量（Dougherty 等，1988；洪健等，2001）。图 1-1 马铃薯 Y 病毒属病毒的粒体形态 Fig. 1-1Particle morphology of potyviruses寄主范围马铃薯 Y 病毒属病毒分布广泛。一些病毒的寄主范围较窄，但大多数具有中等宽的 寄主范围，少数病毒可以侵染 30 多科植物。该属病毒能侵染单子叶作物和双子叶作物， 主要包括茄科、苋科、藜科、菊科和豆科植物，在马铃薯、烟草、番茄、玉米、大豆等 重要农作物上引起严重危害。病毒的传播该属大多数病毒可由蚜虫以非持久性方式传播。蚜虫主要以刺吸式口器刺入植物体 组织内吸取含病毒的汁液后获毒，病毒在短时间内有侵染性，一般不超过一个小时；蚜 虫传播病毒需要病毒编码的两种蛋白，一种是衣壳蛋白（Coat protein，CP），另一种是 辅助成分-蛋白酶（Helper component-proteinase，HC-Pro）（Sako 等，1981）。该属一些成员也能经种子传播或机械传播，机械接种可感染 120 种植物，现在已经 知道该属有 14 种病毒可以通过种子传播。病毒是否能够种传取决于寄主植物与病毒的 基因型，种传病毒的基因组中应含有种传所需的基因（Johansen 等，1996）。细胞病理马铃薯 Y 病毒属的线状病毒粒子在感病寄主的细胞质中分散或成束分布。该属所有 病毒都在寄主细胞质中产生一种圆柱状或圆锥状内含体，在横切面上呈风轮状、卷筒状、 环状、片层状，纵切面上呈束状或者管状等，不同病毒的柱状内含体有较大差异。 1.3.2 马铃薯 Y 病毒属病毒的分子生物学特性 病毒基因组的结构马铃薯 Y 病毒属病毒为线状单分体正义 RNA 病毒，基因组全长约 10 kb，5′端共价 结合基因组连接蛋白（viral protein genome-linked，VPg），3′端为一个 Poly（A）尾巴。 5′-端和 3′-端各有一段非翻译区（Untranslated region， UTR）。基因组为单一开放阅读框 架（ORF），编码一个 350 kDa 的多聚蛋白（Polyprotein），经过翻译后加工成具有不同功能的成熟蛋白（Riechmann 等，1992）。在多聚蛋白的加工过程中，有三种病毒编码