kegt基因对冷季型草坪草转化及转基因草坪草耐盐性鉴定-transformation of kegt gene on cold-season turfgrass and identification of salt tolerance of transgenic turfgrass.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得宁夏大学或其它教育机构的学位或证书而使 用过的材料。与我一同工作的老师、同学、朋友对本研究所做的任何贡献均已在论文 中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解宁夏大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交 论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存、汇编学位论文。同意宁夏大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位 论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日第一章 引 言草坪(truf , lawn)是人工培育的，以草本植物覆盖地面形成的一层绿色植被覆盖，该植被覆盖 包括植物的地上部分，以及地下的根、茎部组织与近地表的土壤混合形成的部分[1]。草坪草是（burfgrasses）指用于草坪规划建设的植物；大部分的草坪草属于禾本科植物，只有一少部分的 属于莎草科植物。草坪草是通过人工铺设的，目前，大约有 40 种草坪草用于草坪的人工建植[2 ,3]。 根据草坪草对环境的适应情况可将其分为冷季型草坪草和暖季型草坪草两大类。一类是冷季型草 坪草又称“冬绿型草”，其品种主要有高羊茅（Festuca arundinacea L.）、多年生黑麦草（Lolium perenne L.）、匍匐型剪股颖（Agrostis stolonifera L.）、紫羊茅（Festuca rubra L.）、草地早熟禾（Poa pratensis L.）等，主要分布在我国的西北、东北、华北以及华东、华中等长江以北的广大 地区以及长江以南的部分高海拔冷凉地区。草地早熟禾、高羊茅多年和生黑麦草都是最广泛种植 的冷季型草坪草种。另一类是暖季型草坪草，沟叶结缕草（Manilagrass）、天堂草（Tifdwarf Bermudagrass）等主要分布于长江以南以及以北部分地区。草坪是人类生态系统中的重要组成部分。绿色的草坪给人以清新、凉爽和愉悦的感受，为人 们提供一个愉快、舒适、和谐的工作和生活环境。随着经济的发展和生态意识的加强，草坪已成 为现代人类生活环境与现代文明的重要组成部分。对冷季型草坪草的研究工作也开展得越来越多, 由最初的形态学、生理生化研究逐步向分子生物学研究深入[4,5]，目前正朝着引入抗逆性基因等方 向发展[6-9]。干旱、土壤盐渍化是一个世界性的问题。据统计，全球干旱地区约占土地总面积的 36%；而 各种盐渍土约 9.5 亿公顷，占全球陆地总面积的 10%，分布于全球的 100 多个国家和地区。而且， 由于土壤的次生盐渍化，全球盐渍化面积还在迅速增加[10]。我国土壤盐渍化也十分严重，据统计, 盐渍土面积越为 9913 万公顷,其中已开垦种植的盐渍土面积为 921 万公顷,尚有大量的潜在盐渍化 土壤可以开发利用。现有耕地中 31.1%的面积受到盐碱危害，而如何利用大面积盐碱地是全人类 迫切需要解决的问题。我国也一样存在这样的问题。研究草坪草对逆境胁迫的反应机制,提高草坪 草的抗逆境胁迫能力[11]，培育抗旱、耐盐等抗逆性强的草坪草新品种，对严重缺水区域、盐碱区 域有很大的应用价值。1.1 草坪草遗传转化进展品质改良一直是育种学家追求的目标，然而与经过几个世纪人工驯化和选择的水稻、玉米、 小麦等农作物相比，草坪草育种起步较晚。经过多年的发展，转基因技术的日趋成熟为草坪草提 供了新的契机。与传统育种技术相比，转基因技术可以极大地节约了人、财、物力[12] 。随着社 会的进步，人们现在越来越看重草坪草的应用，因此，草坪质量的优劣是目前世界各国关注的重 点。提高草坪草的抗性已经成为选育优质抗逆草坪草的研究前沿[13]。1.1.1 草坪草遗传转化受体系统的建立研究发现，根据国内外对草坪草的组织培养、遗传转化现状的分析，结果表明：无论利用植物体细胞培养系筛选新品种，还是利用外源基因对草坪草的改造，都需要优化植物的离体再生系 统，即高效植物遗传转化受体系统的建立；否则，极低的再生能力将直接影响到变异系的筛选和 外源基因转化的效率。因此，上世纪 70 年代以来，人们对植物遗传转化受体系统的研究已做了 大量的工作，先后建立了原生质体再生系统、悬浮细胞再生系统、愈伤组织再生系统、直接分化 再生系统和生殖细胞再生系统等[14] 。通过实验表明，植物再生系统的建立中，单子叶植物要比 双子叶植物困难的多，因此，对于草坪草这样的单子叶植物来说，选用愈伤组织再生系统是最为 理想的。1.1.2 草坪草基因转化方法世界首次转