kisspeptinnkb在皖西白鹅生殖轴上的表达及其与性腺激素关系研究-expression of kisspeptinnkb on reproductive axis of wanxi white geese and its relationship with gonadal hormones.docxVIP

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2018-05-28 发布于上海
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kisspeptinnkb在皖西白鹅生殖轴上的表达及其与性腺激素关系研究-expression of kisspeptinnkb on reproductive axis of wanxi white geese and its relationship with gonadal hormones

摘要Kisspeptin是2001年发现的一种肽类激素，它是由黑色素瘤转移抑制基因（kiss-1基因）编码的视黄酸家族的神经肽，2003年发现kisspeptin与其受体GPR54在生殖功能调控中具有重大作用。神经激肽B（neurokininB，NKB）是含十个氨基酸的多肽，属于速激肽家族，近年来，NKB对生殖内分泌的调控作用也越来越受到重视，被认为是除kisspeptin外，在生殖内分泌调控中起重要作用的又一因子。目前国内外关于kisspeptin与NKB在生殖功能调控方面的研究已成为热点，但有关kisspeptin、NKB在禽类尤其是鹅上的研究未见报道。本试验以青春期、产蛋期、就巢期和休产期雌性皖西白鹅为研究对象，采用免疫荧光双标结合激光显微共聚焦技术，检测kisspeptin/NKB在不同生理时期皖西白鹅下丘脑、垂体、卵巢上的定位，并用FV10-ASW3.0软件对其进行半定量荧光强度的测定，分析其在生殖轴时相和空间表达的变化规律。同时结合酶联免疫、放射性免疫等分析方法，运用相关性分析，阐明不同生理时期皖西白鹅外周血清中kisspeptin/NKB含量的变化与性腺激素之间的潜在联系，为进一步研究kisspeptin/NKB在皖西白鹅生殖上的作用及其机制提供一定的科学理论依据。结果显示：（1）Kisspeptin/NKB在不同生理时期雌性皖西白鹅生殖轴上均有不同强度的荧光共表达，且各个时期kisspeptin与NKB的平均荧光强度值差异均不显著（P＞0.05）。①下丘脑弓状核、后内侧核：青春期和就巢期的平均荧光强度显著高于产蛋期（P＜0.05）和休产期（P＜0.05），青春期与就巢期、产蛋期与休产期差异均不显著（P＞0.05）。②下丘脑室旁核：青春期和就巢期的平均荧光强度差异不显著（P＞0.05），但显著高于产蛋期（P＜0.05）和休产期（P＜0.05），同时产蛋期时的平均荧光强度也显著高于休产期（P＜0.05）。③垂体：不同生理时期腺垂体上均有分布，但神经垂体未见表达。青春期、产蛋期和就巢期腺垂体上的平均荧光强度显著高于休产期（P＜0.05），青春期和产蛋期差异不显著（P＞0.05），但显著高于就巢期（P＜0.05）。④卵巢：不同生理时期卵巢上均存在不同强度的荧光共表达。青春期时仅在卵巢的基质、间质和生殖上皮上发现有kisspeptin/NKB荧光表达，而其余三个时期均在各级卵泡的颗粒层、卵泡膜和间质上发现较强的免疫荧光，以卵泡膜表达量最高，产蛋期时卵巢各部位存在的平均荧光强度均显著高于就巢期（P＜0.05）和休产期（P＜0.05），且就巢期显著高于休产期（P＜0.05）；青春期时卵巢间质上存在的kisspeptin/NKB平均荧光强度与产蛋期差异不显著（P＞0.05），但显著高于就巢期（P＜0.05）和休产期（P＜0.05）。（2）不同生理时期雌性皖西白鹅血清中kisspeptin和NKB的含量在休产期显著高于就巢期（P＜0.05）、青春期（P＜0.05）和产蛋期（P＜0.05），就巢期和青春期含量差异不显著（P＞0.05），但显著高于产蛋期（P＜0.05）；孕酮和雌二醇的含量在产蛋期显著高于其余三个时期（P＜0.05），就巢期显著高于休I产期（P＜0.05）和青春期（P＜0.05），休产期显著高于青春期（P＜0.05）。相关性分析结果显示雌二醇与kisspeptin、NKB的相关系数R分别为-0.835和-0.780；孕酮与kisspeptin、NKB的相关系数R分别是-0.520和-0.531。根据以上结果得出结论：（1）kisspeptin/NKB在青春期和就巢期时皖西白鹅的下丘脑、青春期和产蛋期时皖西白鹅的腺垂体及卵巢上表达最强，而休产期时生殖轴上的kisspeptin/NKB表达最低，提示，kisspeptin和NKB在皖西白鹅不同生理阶段生殖轴上均可能发挥重要的调节作用。（2）不同生理时期雌性皖西白鹅血清中kisspeptin和NKB的平均含量呈现休产期最高，就巢期和青春期次之，产蛋期最低的规律；而孕酮和雌二醇的平均含量则呈现产蛋期高，就巢期和休产期相对较低，青春期最低的规律。（3）血清中雌激素、孕酮水平与kisspeptin和NKB的含量均呈负相关。关键词：kisspeptin，NKB，皖西白鹅，生殖轴，性腺激素AbstractKisspeptinisakindofneuropeptideoftheretinoicacidfamily,whichwasfoundin2001andencodedbythenon-metastaticgeneofmelanoma(kiss-1),manyresultsshowedthatkisspeptinplayedanimportantroleintheregulation