肾毒宁冲剂抗慢性肾衰大鼠自由基损伤实验研究.docVIP

肾毒宁冲剂抗慢性肾衰大鼠自由基损伤实验研究 　　 基金项目：浙江省科技计划项目加速慢性肾衰进展因素及肾毒宁冲剂干预作用研究，编号：2003C30046 　　 摘要 目的：观察肾毒宁冲剂对5／6肾切除大鼠氧自由基的影响。方法：取清洁级SD雄性大鼠40只，通过5／6肾切除法制造慢性肾功能衰竭(CRF)动物模型，术后2周根据血肌酐值分为病理组、尿毒清组及肾毒宁组。对后两组喂与相应药物，喂药第8周后处死大鼠，测血红蛋白(Hb)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、24h尿蛋白定量(Pro)，及血浆超氧化歧化酶(SOD)、谷光甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)。结果：肾毒宁冲剂可显著降低CRF大鼠的肾组织的MDA，从而改善肾功能。结论：肾毒宁可显著改善肾功能，其机理可能与其提高大鼠肾组织清除过氧化物的能力有关。 　　关键词 慢性肾衰 肾毒宁冲剂 大鼠 自由基损伤 实验研究 　　慢性肾功能衰竭(CRF)是危害人类健康的危重病之一。美国第三届国内健康和营养调查NHANESⅢ (1988~1994)[1]统计结果表明肾小球滤过率（GFR）轻度下降在人群中发病率为3%，GFR中度下降发病率4．3%，GFR严重下降发病率为0．2%。临床发现肾毒宁冲剂具有显著延缓慢性肾功能衰竭进展的作用。为探讨其机理，我们进行了该药防治慢性肾功能衰竭大鼠自由基损伤的研究。 　　 　　1 材料 　　 　　1．1 实验药物：肾毒宁冲剂（由制大黄、制黄精、黄芪各20g，丹参30g，桃仁、仙灵脾各10g，沉香粉3g等组成）由金华市中医院制剂室制成；尿毒清冲剂，由广州康臣制药厂生产，批号为970902。 　　1．2 实验动物：清洁级雄性SD大鼠40只，体重180~220 g，由上海必凯实验动物中心提供。饲料为上海中医药大学动物实验中心提供的固体饲料。 　　1．3 主要试剂及仪器：SOD、GSH、MDA试剂盒由南京聚力生物医学工程研究所提供；日本产7060自动生化分析仪，752分光光度计。 　　 　　2 方法 　　 　　2．1 模型制作：40只大鼠先适应性饲养1周后，随机分为假手术组(10只)和模型组(30只)，假手术组打开腹腔，剥离肾包膜，但不予肾切除。模型组应用Platt法切除大鼠5／6肾组织，制作CRF大鼠模型。在无菌条件下按40mg／kg体重腹腔注射硫喷妥钠，麻醉后左侧肾区剃毛，局部消毒在???背部左肋脊角约1．5cm处做斜向下外的切口，分离左肾周围脂肪组织，剥离肾包膜，游离出左侧肾脏，然后对左肾皮质进行弧形切除，所切除部分皮质重量占单侧肾脏重量的2／3(0．6～0．7g)。术后1周对右侧肾脏进行全部切除，先将大鼠麻醉、消毒后，从距背部右肋脊角约1．5cm左右处做斜向下外的切口，游离出右肾，然后进行右肾全切，两次手术共切除肾脏约80％。 　　2．2 实验分组：第二次手术后2周行大鼠断尾采血以进行血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)检查，剔除手术死亡的大鼠9只后，根据血Scr值将手术成功的模型大鼠随机分为3个组即病理组(6只)、尿毒清组(8只)、肾毒宁组(7只)，使各模型组的血Scr值无显著性差异（P0．05）。 　　2．3 用药方法：各组大鼠分笼喂养，随意饮水。尿毒清组、肾毒宁组大鼠每日每只灌胃给予相应药液3ml，用药量均相当于成人临床用药量的20倍，假手术组、病理组大鼠给予等量生理盐水灌胃，疗程均为8周，8周后腹主动脉取血并取肾皮质加0．9％生理盐水制成匀浆，取上清液备测。 　　2．4 观察指标及检测方法：血红蛋白(Hb)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)由自动生化分析仪检测，24h尿蛋白定量由常规方法检测，血浆超氧化歧化酶(SOD)、谷光甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)用硫代巴比妥酸显法，试剂盒均购自于南京聚力生物医学工程研究所。 　　肾组织SOD、GSH、MDA的测定方法同上。 　　2．4 统计学方法：所有数据用（x±s）表示，组间比较采用单因素方差检验，由SPSS10．0统计软件完成。 　　 　　3 结果 　　 　　3．1 一般情况:实验期间假手术组大鼠表现机警，反应快，皮毛致密、整齐而有光泽，生长、进食及活动情况均无明显异常，体重增加；病理组明显营养不良，精神萎靡，活动迟缓，食欲不振，皮毛蓬松、枯槁无光泽；尿毒清组、肾毒宁组大鼠与假手术组大鼠一般表现无太大差别，只是皮毛干燥无光。 　　3．2 各组大鼠血清Scr、BUN及24h尿蛋白定量的比较：见表1。 　　结果表明：肾毒宁能显著降低CRF大鼠血肌酐、尿素氮的水平(P[2-3]。同时，脂质过氧化物使纤维母细胞对胶原基因的表达增加，促进胶原在系膜区沉积，加重肾间质纤维化，使肾组织形态和结构改变，肾功能进行性损害[4]。 　　4．2 肾毒宁冲剂组方依据及疗