银杏叶提取物对脑缺血再灌注大鼠线粒体ATP敏感性钾通道影响.docVIP

银杏叶提取物对脑缺血再灌注大鼠线粒体ATP敏感性钾通道影响 　　摘要：目的：研究银杏叶提取物抗脑缺血再灌注损伤作用与线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)开放的关系。方法：用大脑中动脉线栓法(MCAO)制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。造模前静脉给予银杏叶提取物15mg?kg－1和(或)选择性mitoKATP拮抗剂5－羟基癸酸(5－HD)10 mg?kg－1预处理，以脑梗死体积、神经缺陷评分、SOD活性和丙二醛含量，评价银杏叶提取物抗脑缺血再灌注伤的作用与mitoKATP的关系。结果：银杏叶提取物具有改善大鼠缺血再灌注引起的脑功能和组织损伤，但此作用可被预先给予的5－HD减弱。结论：银杏叶提取物抗脑缺血再灌注伤作用与mitoKATP开放有关。 　　关键词：银杏叶提取物；ATP；钾通道；脑缺血 　　中图分类号：11285.5　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)07－1462－02 　　 　　银杏为银杏科植物，又称白果，近代研究证实它对心脑血管及多种疾病有确切的治疗作用。从银杏叶中提取的有效药用成分的化合物主要为总黄酮类及银杏内酯等，简称为银杏叶提取物(ginkgo biloba extract，Egb761)，是临床上防治缺血性脑损伤广泛应用的最有效药物之一。线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)是存在于许多组织细胞线粒体内膜上的一种可调节线粒体代谢活动的钾离子通道。研究表明，mitoKATP在脑细胞的保护中具有重要作用。银杏叶提取物介导脑保护作用的机制是否与mitoKATP有关目前尚未见报道，笔者进行了相关研究。 　　 　　1　材料 　　 　　1．1　药品与试剂 Egb761(临沂爱康药业有限公司产 　　 脑中动脉始端，栓塞大脑中动脉，造成局灶性脑缺血：大鼠脑缺血2h后，拔出尼龙线，恢复脑组织血供。模型对照组大鼠则在尼龙线小球端插入至大脑中动脉始端后，立即拔出。实验过程中维持直肠温度在37℃左右。 　　2．3　神经缺陷评分　以经修改的Bederson评分法作为评分标准，具体如下：提尾悬空大鼠，手术对侧前肢无屈曲、腕屈及同时腕屈与肘屈分别计为0、1与2分；大鼠行走路径向手术对侧无偏移、有偏移及偏移呈圆形甚至原地旋转分别计为0、1与2分；刺激大鼠手术对侧颊须，反应灵敏、不灵敏及没有反应分别计为0、1与2分；动???躯体向手术对侧无扭转、偶尔扭转及频繁扭转分别计为0、1与2分：总分为8分，于再灌注8、16及24h各进行1次神经缺陷评分，24h内3次评分的平均值作为评价指标。 　　2．4　脑脑梗死体积的测定　大鼠脑缺血2h再灌注24h后，颈椎脱臼处死，迅速取脑，沿冠状切面切成5片，每片厚约2.5mm，脑片置于2％的TIC溶液中20min，非缺血组织呈玫瑰红色，梗死组织呈苍白色：脑片用10％甲醛溶液固定。数码相机拍片，其图像输入计算机，用NIH image program图像分析软件测量脑片梗死面积，各大鼠5层脑片面积之和乘以层厚即脑梗死体积。 　　2．5　脑组织超氧化物歧化酶(sOD)和丙二醛(MDA)测定　另取40只雄性SD大鼠按照上述方法分组，大鼠缺血2h再灌注24h后，颈椎脱臼处死，迅速取脑，除去嗅球、小脑和低位脑干后，用冰生理盐水冲洗，吸干，脑组织于低温(一70℃)冻存。称重后液氮匀浆，加入适量生理盐水得到10％的脑组织匀浆。根据试剂盒说明测定心肌匀浆液中SOD的活性和MDA的含量。 　　2．6　统计分析 实验结果用x±s表示，统计分析采用SPSS12.0统计软件包，均数间两两比较用q检验。 　　 　　3　结果 　　 　　3．1　脑梗塞体积　模型对照组与单纯5－HD预处理组无统计学差异(P＞0.05)；缺血再灌注前给予Egb761预处理脑梗死体积小于模型对照组(P＜0.01)；先给5－HD，再给Egb761预处理，可部分抵消Egb761对大鼠缺血再灌注的保护作用，脑梗塞体积小于模型对照组(P＜0.01)，高于Egb761组(P＜0.05)，见表1。 　　 　　 　　3．2　神经缺陷评分　模型对照组与单纯5－HD预处理组无差异(p＞0.05)；缺血再灌注前给予Egb761预处理神经缺陷评分低于对照组(P＜0.01)；先给5－HD，再给Egb761预处理，可抵消Egb761对大鼠缺血再灌注脑功能的保护作用。与模型对照组差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。3，3 SOD活性和MDA含量Egb761组SOD活性高于模型对照组(P＜0.01)，MDA含量低于模型对照组(P＜0.01)，5－HD+Egb761组SOD活性高于模型对照组(P＜0.01)，MDA含量低于模型对照组(P＜0.01)，但SOD活性与MDA含量均与Egb761组无统计学差异(P＞