聚合酶链式反应（PCR）检测鼠疫菌特异性基因.pptVIP

变性：将作为模板的DNA链加热到95℃，使双链解旋成为单链。 引物附着：当温度下降到一个较低的温度时，加入的引物与模板链结合。 链延伸：温度再次升高到多聚酶的作用温度时，耐热的DNA多聚酶催化附着在模板链上的引物延长,成为一条新的DNA链。 注意事项 防止污染：专用或单独的实验室；更换手套；试剂应小份储存；吸头离心管等需洁净；尽量最后加模板等 阳性对照和阴性对照：每次实验均需包含阳性对照和阴性对照。 PCR各基本成分 Buffer： 镁离子浓度一般为1.5mM PCR反应需要由缓冲液提供一定的离子环境。镁离子浓度为1.5mM。镁离子浓度可以调节来改善PCR的质量。一般说来，降低镁离子浓度能改善特异性，而在一定范围内，升高镁离子浓度可增加灵敏度。 PCR各基本成分 引物：是PCR特异性反应的关键，引物应有特异性。 长度常为20bp左右，扩增跨度以200-500bp为宜，G+C含量以40-60%为宜，ATGC最好随机分布。避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补。引物和模板之间在引物的5’侧可有个别不配对碱基。3端碱基应严格要求配对。 引物中有或能加上合适的酶切位点。 引物量： 每条引物的浓度0.1～1μmol/L，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。 通常配制成100μM的储存液，储存在-20℃，临用时稀释成10μ