天然药物实验报告.doc

天然药物化学实验 实验报告 实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定 （一）实验目的要求 制备芦丁，供药用。 通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。 熟悉重结晶技巧。 了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。 （二）实验的基本原理 芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。 2. 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。 3. 芦丁的鉴定原理 （1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。 （2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。 (三) 实验内容 1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。 2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。 3. 溶剂重结晶精制芦丁。 4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁 (四) 实验药材仪器与试剂 1. 实验药材 槐米20g。 2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml烧杯，250ml园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。 3. 试剂：硼砂、氧化钙、 HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。 （五）实验方法与注意事项 1. 芦丁的提取 （2）方法二（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，（注意小心沿侧边放入磁子），加水200ml，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min，（设定温度为105°C，当加热到103°时，观察到：液体开始沸腾，有气味，有泡沫产生。药材翻滚，圆底烧瓶壁有水滴。且随着时间的增多，泡沫越来越多，加热20min左右后，泡沫丰富。稍调??转速。），趁热过滤。残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，（观察到：析出后，有黄色晶体，上清液为棕色，香卞甘味。抽滤时，固体为淡黄色。烘干后，呈黄绿色）。减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。（滤纸+漏斗145.02g，滤纸+漏斗+样品 146.617g，故知样品为1.597g，得率为7.99%） （附加步骤：旋转蒸发，浓缩至50ml，观察是否有残余芦丁。其中，重点注意旋转蒸发仪的使用。组装好仪器后，关闭玻璃气阀，打开真空泵，至0.05Mpa时，打开加热开关，旋转开关等。然后开始旋转蒸发，过程中，要耐心等待，并时刻注意蒸发液体，防止喷溅出蒸发瓶，造成实验失败。） 2. 芦丁的精制 （1）方法一（醇-水重结晶法）取粗制芦丁1g，(实际上为1.008g，其中，粗制芦丁为淡黄色固体，有香味)，置于250ml园底烧瓶中，加90%(实际为80%)乙醇30ml加热回流15分钟，趁热抽滤。（滤液为黄色透明油状液体）。滤液置250ml烧杯中，向滤液中加蒸馏水（约3~4倍量）至溶液呈明显混浊，室温放置，抽滤得精致芦丁。用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，晾干，称重。（滤纸+漏斗29.69g，滤纸+漏斗+样品30.20g，故知样品为0.51g）。 3.鉴定 （1）点滴显色反应 取芦丁的甲醇溶液（供试液）分别点在滤纸上，挥去溶剂，然后分别加下列试剂，观察显色前后颜色及荧光的变化。 供试液： 芦丁的甲醇溶液。 显色剂： 2%三氯化铝乙醇溶液[在紫外灯下λ365nm观察显色前后颜色及荧光的变化] （2） 薄层色谱鉴定 吸附剂： 硅胶GF254薄层板（5.0cm X 10.0cm）。 样 品： 自制芦丁（用甲醇溶解，浓度约1mg/ml） 对照品： 芦丁对照品的甲醇溶液。 展开剂： 三氯甲烷-甲醇-甲酸（7∶3∶0.5） 显 色： a.先在可见光下观察，然后在紫外光下观察（365nm紫外灯下观察） （观察到两点，呈深色） b.喷三氯化铝试剂前后观察颜色变化（365nm紫外灯下观察） （对照组为浅褐色，实验组为黄绿色，有拖尾） 实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。 Rf样品=3.00/5.75=0.522 总结： 1.实验应细心，耐心，如旋转蒸发时。 2从失败中总结经验，改进实验的方法，为以后积累经验。 3.实验的过程中，需要团队合作，从不同的方面来注意、分析实验，得到最好的结果。 5 .注意事项 (1) 硼砂因能与芦丁中的邻二酚