(食品微生物课件）第五篇 章微 微生物生长.ppt

第五章;微生物生长是代谢的结果。当同化超过异化作用，细胞物质量增加，个体重量和体积增大，就是生长。个体数量的增多称为繁殖。生长是繁殖的基础，繁殖则是生长的结果。-单细胞微生物如细菌、酵母菌的个体细胞的增大即细胞物质的增加是有限度的，细胞长大到一定程度就开始分裂繁殖，菌体数量增多。细菌旺盛生长时几十分钟就可繁殖一代。因此它们的生长往往是通过繁殖表现出来的，本质上是以群体细胞数目增加为生长标志。丝状微生物如放线菌、霉菌的生长主要表现为菌丝的伸长和分枝，通常以菌丝的体积和重量增长(细胞物质量的增加)来衡量生长状况。 ; 微生物的旺盛生长，需要有合适的营养物质和外界环境条件。外界环境条件有最低、最适和最高界限之分。低于最低或高于最高值时，微生物的生长将受到抑制或致死，只有在最适条件下微生物才会快速协调地生长繁殖。 微生物在自然界中不仅分布很广，而且都是混杂地生活在一起。土壤是微生物生活的大本营 。1粒沙或1克土中常生长着种类和数量众多的细菌及其它微生物。要想研究或利用某一微生物，必须首先把混杂的微生物类群分离开来，以得到只含一种微生物的纯培养。微生物学中将在实验室条件下得到1个细胞繁殖后代的过程称为纯培养。 ;一、纯培养的分离方法 微生物的培养分离，是研究和利用微生物的第一步，是微生物工作中最重要的环节之一。最常用的分离方法有稀释法、划线法、单细胞挑取法及利用选择培养基分离法等。;1.稀释平板法 稀释平皿倾注法--这是常用的纯种分离法。先将待分离的材料作一系列的稀释(如1:10、1:100、1:1000、1: 10000……)，然后分别取不同稀释度的溶液少许，与已熔化并冷却至45℃的琼脂培养基相混合摇匀后，倒入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，平皿上可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌或微生物繁殖而成的，随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。; 平皿划线分离法A.扇形划线;B.连续划线;C.方格划线;3. 单细胞挑取法 这种方法是从待分离的材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养。具体方法是将显微镜挑取器装置在显微镜上，把一滴细菌悬液置于载玻片上，用安装在显微镜挑取器上的极细的毛细吸管，在显微镜下对准某一个细胞后挑取，再接种于培养基上培养。此法需要非常熟练的操作人员，多限于高度专业化的科学研究中采用。;4.利用选择培养基分离法不同微生物需要不同的营养物质，有些微生物生长适于酸性环境，有些则适于碱性环境，各种微生物对不同的化学试剂如消毒剂(酚)、染料(结晶紫)、抗生素及其他物质等具有不同的抵抗能力。利用这些特性，便可配制成适合于某种微生物生长，而限制其他微生物生长的各种选择性培养基，以达到纯种分离的目的。 ; 也可以将待分离的样品进行适当处理，以消除不希望分离到的微生物。例如，想分离得到芽孢细菌，可在倒平皿前将样品用高温处理一段时间，以破坏所有的或大部分的非芽孢细菌，这样分离得到的菌落大多是芽孢细菌。 对一些生理类型比较特殊的微生物，为了提高分离的机率，往往在涂布分离前先进行富集培养，其目的是提供一个特别设计的培养环境，以帮助所需的特殊生理类型的微生物的生长，同时抑制其他类型微生物生长。 ;二、微生物生长的测定方法 微生物特别是单细胞微生物，体积很小，个体生长很难测定，而且也没有什么实际应用价值。因此，测定它们的生长不是依据个体的大小，而是测定群体的增加量，即群体的生长。微生物生长量的测定方法很多，可以根据菌体细胞数量、菌体体积或重量作直接测定，也可用某种细胞物质的含量或某个代谢活性的强度作间接测定。;1．细胞数量的测定　　直接测数法或总菌数测定法　　本法仅适用于单细胞的微生物类群。测定时需用细菌计数器(petroff-Hausser counter）或血球计数板(适用于酵母、真菌孢子等)，具体做法是取定容稀释的单细胞微生物(细菌)悬液 放置在计数板上，在显微镜下计数一定体积中的平均细胞数，换算出供试样品的细胞数。 　　　本法的优点是快捷简便、容易操作，缺点是难于区分死活细胞及形状与微生物类似的杂质。 　　;图 1.血球计数板法 图 2.仪器;比浊法　　这是测定悬液中细胞数的快速方法。其原理是根据在一定的浓度范围内，菌悬液的微生物细胞浓度与液体的光密度成正比，与透光度成反比。菌数越多，透光量越低。因此，可使用光电比色计测定，通过测定菌悬液的光密度或透光率反映细胞的浓度。 　　本法常用于观察和控制在培养过程中微生物菌数的消长情况。如细菌生长曲线的测定和发酵罐中的细菌生长量的控制等。;稀释平板计数法　　在大多数的研究和生产活动中，人们往往更需要了解活菌数的消长情况。从理