钙通道蛋白stim1orai1对肝癌细胞增殖 凋亡 侵袭作用的初步研究-preliminary study on the effect of calmodulin stim 1 orai 1 on proliferation, apoptosis and invasion of hepatocellular carcinoma cells.docxVIP

目录英文缩略词释义表……………………………………………………4中文摘要………………………………………………………………6英文摘要………………………………………………………………7引言……………………………………………………………………9第一部分STIM1/Orai1慢病毒载体的构建材料和方法…………………………………...……………………….111.实验材料111.1主要仪器设备111.2细胞株111.3主要试剂111.4主要试剂的配制122.实验方法142.1质粒载体的构建142.2载体慢病毒包装及感染172.3WeaternBlot法检测定STIM1、Orai1蛋白172.4免疫荧光方法分析细胞定位192.5胞内游离钙水平变化的检测19结果…………………………..…………………………………..……203.实验结果203.1重组质粒载体的鉴定203.2病毒感染效检测233.3感染前后STIM1/Orai1蛋白表达检测233.4外源STIM1Orai1蛋白在胞内的定位263.5细胞胞内钙水平变化检测264.小结27第二部分STIM1/Orai1对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响材料和方法…………………………………...……………………….281.实验材料281.1主要试剂281.2主要试剂的配制282.实验方法282.1细胞STIM1/Orai1蛋白的表达检测282.2细胞生长曲线制作292.3细胞增殖周期检测292.4细胞凋亡率的检测302.5“Transwell”检测细胞侵袭、迁移能力30结果……………..……………………………………...…..……313.实验结果313.1肝癌细胞株与正常肝组织细胞的STIM1Orai1蛋白表达比较313.2SOCE对细胞生长曲线的影响343.3SOCE对细胞增殖周期的影响343.4SOCE对细胞凋亡率的影响363.5SOCE对细胞侵袭、迁移能力的影响374.小结38讨论39结论43参考文献44致谢47综述56英文缩略词表释义表AcrAcrylaniide丙烯酰胺PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链式反应BisBisacrylamideN,N’-甲叉双丙烯酰胺CPACyclopiazonicacid环匹阿尼酸，特异性Ca2+池耗竭剂DAPI4′，6-diamidino-2-phenylindole4′，6-二脒基-2-苯基吲哚DTT3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide二硫苏糖醇EBEthidiumbromide溴化乙锭ECLEnhancedchemiluminescence增强化学发光法EDTAEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟ICRACCalcium-ReleaseActivatedCalciumCurrent钙库释放激活的钙电流IP3Inositol1,4,5-triphosphate三磷酸肌醇AmpAmpicillin氨苄霉素LBLuria-bertaniculturemediumLB培养基HRPHorseradishperoxidase辣根过氧化物酶RT-PCRReversetranscription-PCR逆转录PCRPMCAPlasmamembranecalciumATPase质膜Ca2+-ATP酶PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟PVDFPolyvinylidenefluoridemicroporousmembrane聚偏氟乙烯膜PIPropidiumIodide碘化丙锭SOCEStore-operatedCa2+entry钙池操纵性钙通道BSAAlbuminfrombovineserum牛血清白蛋白DEPCDiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯GAPDHGlyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase甘油醛-3-磷酸脱氢酶SERCASarcoplasmic/endoplasmicreticulumCa2+ATPase肌质网／内质网Ca2+-ATP酶EREndoplasmicreticulum内质网ASMCArterialsmoothmusclecell动脉平滑肌细胞FAKFocaladhesionkinase局部粘着斑激酶DMSOSOCCDimethylsulfoxideStore-operatedCa2+channels二甲基亚砜钙池操纵性钙通道STIMstromalinteractionmolecule基质相互作用分子，内质网Ca2+感受器TEMEDN，N，