甘草素改善去卵巢appps1双转基因小鼠认知功能障碍及机制研究-glycyrrhizin improves cognitive dysfunction and its mechanism in ovariectomized app ps 1 transgenic mice.docxVIP

英汉缩略语对照表缩写PS1英文全称Presenilin 1中文全称早老素 1BACE1PVDFBeta-site APP Cleaving Enzyme1Polyvinylidene difluorideβ-淀粉样蛋白裂解酶聚偏氟乙烯OVXOvariectomy卵巢切除ADAlzheimer’s disease阿尔茨海默病ERTEstrogen replacement therapy雌激素替代疗法APPAmyloid precursor protein淀粉样前体蛋白IHCImmunohistochemical staining免疫组化SPSenile plaque老年斑PBSPhosphate buffered saline磷酸盐缓冲液DABDiaminobenzidine二氨基联苯胺ECLEnhanced chemiluminescebce增强化学发光E2CMC-Na17β-estradiolCarboxymethylcellulose sodium17β-雌二醇羧甲基纤维素钠NFTsNeurofibrillory tangles神经纤维缠结PFAParaformaldehyd多聚甲醛IHCImmunohistochemical免疫组织化学TEMTransmission electron microscope透射电镜TrisTris hydroxymethyl amino metha三羟甲基氨基甲烷AβLGAmyloid β peptideLiquiritigeninβ-淀粉样蛋白甘草素1甘草素改善去卵巢 APP/PS1 双转基因小鼠认知功能障碍及机制研究 摘要目的：研究甘草素对去卵巢 APP/PS1 双转基因阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）模型小鼠的学习记忆能力、老年斑、神经 元丢失、凋亡及自噬等的影响，并探讨相关作用机制。本课题研究的 多靶向植物雌激素将为临床上 AD 的防治提供新的实验依据。方法：将 40 只 3 月龄雌性 APP/PS1 双转基因小鼠行假手术或双 侧卵巢切除术，7 天后随机分为四组：假手术组（Sham）、卵巢切除组（OVX）、卵巢切除后给予甘草素治疗组（LG）、卵巢切除后给予雌二 醇治疗组（E2）。甘草素剂量为 30mg/kg·d，雌二醇为 0.1mg/kg。甘草 素为灌胃处理，雌二醇为皮下注射。安慰剂为生理盐水和（或）1%CMC-Na。药物治疗 90 天后，先后进行高架十字迷宫、Morris 水迷宫实验分 别检测各组实验小鼠的焦虑抑郁情绪与空间学习记忆能力的变化；称 重小鼠子宫并观察其形态变化情况；使用免疫组化检测脑内老年斑数 量与面积、神经元及突触形态与数量的变化；通过 Western blot 检测脑 内 β-分泌酶活性、雌激素受体、神经营养因子、凋亡及自噬等的变化； 采用流式细胞技术检测脑内神经元的凋亡及线粒体膜电位变化情况。2结果：1. 行为学检测结果：①在高架十字迷宫检测结果中：Sham组、LG 组和 E2 组穿越开臂的次数和停留时间均显著高于 OVX 组（P0.05），而这三组组间无显著差异（P0.05）；②Morris 水迷宫检 测结果显示：在可视平台实验中，各组小鼠找到平台的平均潜伏期、 搜索路径及游泳速度无明显异（P0.05）；在隐蔽平台试验检测中，Sham 组、LG 组和 E2 组找到平台的平均时间及搜索平台的平均路程较 OVX 组明显缩短（P0.01），该三组间无明显差异（P0.05）；在探索实验检 测中，60s 内 E2 组和 Sham 组穿越平台的次数显著高于 OVX 组（P0.01），LG 组明显增加（P0.05）。2. 小鼠子宫形态及重量显示：LG 组、E2 组和 Sham 组小鼠子宫 重量均显著大于 OVX 组（P0.01），E2 组子宫增殖更为明显并有结节 形成。3. 在免疫组化实验检测结果显示：与 Sham 组小鼠相比，OVX 组 小鼠脑内老年斑（SP）数量及面积明显增加（P0.01），LG 组较 OVX 组明显减少（P0.05），E2 组较 OVX 组显著减少（P0.01），Aβ40 及 Aβ42 检测结果与上述一致；OVX 组较 Sham 组突触减少、断裂且排列 紊乱，LG 组与 E2 组突触排列更规则整齐、连续；与 Sham 组相比， OVX 组神经元数量明显减少（P0.05），甘草素治疗后增多（P0.05）。4. 在 WB 检测结果中显示：各组小鼠脑内 APP 全蛋白表达无明显 变化，与 OVX 组相比，LG 组、E2 组和 Sham 组 BACE1、Bax 的表达 明显下降（P0.05），神经元、神经元前体及突触相关蛋白：NeuN、 DCX 及 PSD95 表达明显增多（P0.05），ERβ、BDNF、GDNF