高产单宁酶的发酵工艺优化及酶学性质分析-optimization of fermentation technology and analysis of enzymatic properties of high-yield tannase.docxVIP

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2018-05-30 发布于上海
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高产单宁酶的发酵工艺优化及酶学性质分析-optimization of fermentation technology and analysis of enzymatic properties of high-yield tannase.docx

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高产单宁酶的发酵工艺优化及酶学性质分析-optimization of fermentation technology and analysis of enzymatic properties of high-yield tannase

中文摘要单宁酶全称是单宁酯酰水解酶（Tannase,EC0），它可水解没食子单宁中的酯键和缩酚羧键，生成没食子酸和葡萄糖。单宁酶用途广泛，主要通过微生物利用富含单宁酸的基质发酵产生。本论文建立了一种高效可行的生产单宁酶的方法，即黑曲霉B0201利用五倍子生料固体发酵产单宁酶，并对该方法的发酵工艺条件及发酵培养基进行了优化。论文研究了单宁酶的酶学性质及冷冻干燥法制备单宁酶粉剂，还对酶法制备没食子酸进行了初步研究。论文通过比较常规灭菌发酵和生料发酵对黑曲霉B0201利用五倍子固体发酵产单宁酶的影响，发现生料发酵具有高效实用的优势。研究了五倍子生料发酵产单宁酶的条件，结果表明，最优发酵培养基为：每5g培养基基质含1%(NH4)2SO4，0.1%NaCl，0.1%MgSO4，20%五倍子，80%麸皮；最佳产酶条件为：液固比1.6:1、温度30℃、初始pH6.0。在该条件下通过96h的培养，单宁酶的活力可达51.2U/gds，是常规灭菌发酵的3.6倍。利用响应曲面法对显著影响产单宁酶的条件进行优化，得到生料发酵产单宁酶的最佳条件为：五倍子含量17%；液固比为1.5:1；温度32℃。在此最佳发酵条件下单宁酶活力达56.2U/gds。对黑曲霉B0201利用五倍子为诱导物生料发酵产胞外单宁酶的提取及酶学性质进行了研究。结果表明：硫酸铵两步沉淀提取单宁酶的饱和度为40%和90%；该酶的最适温度为40℃，最适pH为5.0，低于60℃时的热稳定性高，60℃以上迅速失活。Zn2+，Mg2+，吐温80，EDTA等对酶活力无明显影响，Fe3+，Cu2+，Fe2+,Ba2+，Mn2+，Ca2+，Al3+等对酶有抑制作用。以没食子酸丙酯(PG)为底物，单宁酶的米氏常数Km为0.514mmol/L，Vmax为71.8μmol/L·min。对冷冻干燥法制备单宁酶粉剂的研究表明，酶在冷冻干燥过程中酶活有损失，添加1%的聚乙二醇(PEG)可有效保护酶制剂在冷冻干燥过程不失活，并且具有良好的稳定性。对没食子酸的制备进行了初步研究。直接用生料固体发酵的方法不能制备出没食子酸，没食子酸的制备过程为：生料发酵生产单宁酶——单宁酶的提取——酶法制备没食子酸。关键词：单宁酶，黑曲霉，生料发酵，五倍子，酶学性质AbstractThefullnameofTannaseisthetanninesteracidradicalhydroltyicenzyme(Tannase,theEC0),bywhichesterkeyandshrinkphenolcarboxylickeyofthegallicacidtannincouldbehydrolyzedintothegallicacidandtheglucose.TheTannasewasusedwidely,mainlyproducedbymicrobiologyfermentionusingtannin-richsubstrate.Afeasiblemethodwithhighefficiencyfortannaseproductionwasestablilshedinthispaper,themethodforproducingtannasefromAspergillusNigerB0201withuncookedgallnutundersolid-statefermentation.Andoptimizationoffermentationconditionandtheculturemediumunderthismethodwascarriedout.Inthispaper,enzymaticpropertiesoftannaseandthemethodoffreeze-dryingtoproducetannasepowderwerestudied.Finallywestudiedpartlytheenzymaticsynthesisofgallicacid.AccordingtothecomparativeresearchoneffectofconventionalsterilefermentationanduncookedmaterialfermentationforAspergillusNigerB0201producingtannasewithgallnutundersolid-statefermentation,theadvantagesofuncookedmaterialfermentationwithhighefficiencyandpracticabilityhasbeendiscovered.Throughthestudyofconditionsfortannaseproductionbyuncookedgalln