高尔基体磷酸蛋白2应对炎症以及肝损伤的生理功能分析-physiological function analysis of golgi phosphoprotein 2 in response to inflammation and liver injury.docxVIP

摘要高尔基体磷酸蛋白 2（GOLPH2, GP73）是的一个功能未知的高尔基体二型 跨膜蛋白， 定位在高尔基体顺面，并能够通过细胞内膜系统转运分泌到细胞外 基质。临床和病理研究表明，GOLPH2 与疾病关系密切，尤其在肝炎肝癌和肝 炎患者中发现有 GOLPH2 异常高表达，并且能够分泌到血液，从而可能作为临 床诊断肝癌的血清学标志物。目前关于 GOLPH2 异常表达的研究主要集中在临床研究方面，而针对 GOLPH2 在肝炎和肝损伤中异常表达的细胞和分子机制研究较少，这限制了 GOLPH2 在临床上的应用和价值。本研究主要应用动物和细胞模型，研究 GOLPH2 在肝炎和肝损伤过程中异常表达的过程和部分机制，并初步探讨了 GOLPH2 异常表达的意义。应用肝炎动物模型和肝损伤动物模型，可以跟踪肝炎和肝损伤的发生和进 展过程。研究发现 GOLPH2 对肝炎和肝损伤的反应非常迅速和灵敏，肝脏受到 LPS 或者 CCl4 刺激后 24h 内，GOLPH2 表达水平就迅速升高，并在损伤后 48h， 达到高峰；同时肝炎以及肝损伤修复进入尾声时，GOLPH2 水平缓慢下降， GOLPH2 水平的下降可能还与愈后相关。GOLPH2 在肝脏炎症反应中的异常表达可能是炎症因子（细胞因子）的调 节结果，使用细胞因子体外刺激小鼠原代肝细胞以及肝癌细胞系 Hep3B 细胞， 检测 GOLPH2 表达。结果显示 IL-1b 以及 IL-6 有上调 GOLPH2 的作用，而 TGF-b 能够显著下调肝细胞 GOLPH2 表达水平；没有检测到 TNF-a 以及 IFN-r 对 GOLPH2 的调节效果。这部分研究结果表明 GOLPH2 可能与肝炎过程中免疫细 胞分泌的 IL-1b、IL-6 表达水平升高相关。为了进一步研究 GOLPH2 在肝炎中表达是否存在生理意义，我们第一次构 建和使用了 GOLPH2 基因敲除鼠模型，使用 Cre-Loxp 系统敲除 GOLPH2 基因 外显子 5，结果显示 GOLPH2 存在一种尚未发现的新的可变剪接方式，外显子 6 的 5’端存在 2 个剪接位点，使得 GOLPH2 可以选择两个不同的位置连接外显子 6，属于可变剪接中的可变 3’端剪接方式。由于事先未知的可变剪接的存在， 使得 GOLPH2 敲除鼠变成了外显子 5 缺失的突变鼠，本研究初步研究了外显子5 缺失突变对个体生殖发育有影响，并可能降低了肝脏应激能力。 综合研究结果显示，肝脏 GOLPH2 异常表达可能是肝脏的一种应激形式，并与损伤修复过程密切联系，可能参与了这个过程，同时 GOLPH2 有较强的应 对突变的能力，我们发现了 GOLPH2 新的可变剪接模式。关键词： GOLPH2，肝炎和肝损伤，IL-1b, IL-6，GOLPH2 基因敲除鼠，ABSTRACTGolgi phosphoprotein 2 (GOLPH2, also GP73) is a type Ⅱtransmembrane protein. It is located in the cis- and medial- membrane of Golgi apparatus and could be secreted from the cell through the intracellular trafficking system. Many reports indicated abnormal expression of GOLPH2 in liver diseases, and there are clinical evidences suggest that GOLPh2 might sever as a potential serum marker for hepatocellular carcinoma.The previous studies are mainly on the correlations between GOLPH2 expression levels and different disease; however, the potential pathological mechanisms remain unknown. The goal of this research is to understand the role and regulation of GOLPH2 expression during liver inflammation and damage.The expression level GOLPH2 is sensitive to liver inflammation and damage. Its up-regulated expressi