发酵工艺学课件第6篇 章 种子的扩大培养.pptVIP

也称为生产菌种的制备;要建立起工业化大规模生产的概念！;容积 (m3);第一节 微生物工业菌种的扩大培养;一.种子扩大培养及要求;二.种子扩大培养过程;;(一)实验室种子制备;相对应，菌种进入种子罐的二种方法： 孢子进罐，减少批间差异，可控制孢子质量，工艺简单； 菌丝进罐，缩短种子罐培养时间，适合生长缓慢的放线菌。;1.孢子的制备;放线菌发酵生产的工艺过程;(2)霉菌孢子的制备;米孢子制备流程;米孢子制备工艺流程;产黄青霉菌(P.chrysogonum): 原始菌种→斜面试管→250ml茄子瓶(大米或小米25~28 ℃ ，4~14天 )→ 成熟(真空抽去水分，使水分含量在10%以下，于4 ℃冰箱保存)。 对于不产孢子的赤霉素生产菌(Gibberelline fujikuroi)，也可用大米固体培养基在茄子瓶中培养菌丝体，用作种子罐种子。;(3)细菌培养物的制备;不产孢子的细菌，如生产谷氨酸的棒状杆菌(Corynebacterium)、短杆菌(Brevibacterium)，生产上一般采用斜面营养细胞进行扩大培养，再转入液体摇瓶培养，获得细胞悬液再接种。;２、液体种子制备;(二)生产车间种子制备 ;种子罐;种子罐级数是指制备种子逐级扩大培养的次数。 依据：菌种生长特性，孢子发芽及菌体繁殖的速度以及所用的发酵罐的容积。 种子罐的级数： 　产物的品种 　生产规模 　工艺条件;种子罐级数越少越好，原因： 　 简化生产工艺和控制 　　　减少接种带来的染菌机会 需考虑：尽量延长发酵罐生产产物的时间，缩短由于种子发芽、生产而占用的非生产时间，以提高发酵罐的生产率［产物/ml·h］。　;谷氨酸发酵 一级种子扩大培养 实验室种子 → 种子罐 → 发酵罐 青霉素发酵 二级种子扩大培养 实验室种子→一级种子罐→二级种子罐→发酵罐 链霉素发酵 三级种子扩大培养 实验室种子 → 一级种子罐 → 二级种子罐 → 三级种子罐 →发酵罐 ;第二节 种子质量控制;1.培养基 原材料：如蛋白胨的微量元素、磷含量、氨基酸组分。 琼脂：无机离子 水质：无机盐 供生产孢子用的培养基或作为制备砂土孢子或传代所用的培养基要用单一的氮源。分离选种用的培养基用复杂的有机氮源。;2.温度和湿度： 最适合孢子的培养温度狭窄，常???变温培养孢子，高于最适温度,培养的孢子易老化。 龟裂链霉菌，36.5 ℃培养3天，再用28.5 ℃培养1天比只用36.5 ℃培养4天，孢子产量增加3-7倍。 培养基的湿度对孢子形成的速度、数量和质量有很大的影响。;3.培养时间和冷藏时间 丝状真菌生长阶段：孢子发芽和基内菌丝的形成→气生菌丝→孢子形成→孢子成熟→菌丝自溶。 （1）孢子的培养时间：过于年轻的孢子经不起冷藏，过于衰老的孢子会导致生产能力下降。黑曲霉：斜面培养 3d和15d产酸分别为47.1%和49.1%，培养6d和10d，产酸分别为61.9%和71.3%。 （2）孢子的冷藏时间：总的原则是宜短不宜长。冷藏时间长，则产量下降。;4.接种量 接种量要适中。 接种斜面：菌落均匀分布于整个斜面，隐约可分菌落者为正常接种。 接入种子罐的孢子数量也要适中。;二.影响种子质量的因素及其控制;温度：最适温度。 通气：前期低氧，后期需氧较多。通气影响种子质量，影响产量。 搅拌： 泡沫：减少发泡； 中间补料：补入一定量的种子培养基。;　种龄(seed age)指种子罐培养种子从开始至结束的培养时间。 　在种子罐中，培养时间延长－－菌体量增加－－基质消耗及代谢产物积累－－菌体量不再增加－－老化 　过老：生产能力下降，菌体自溶。 　过嫩：前期生长缓慢，发酵周期延长，产物形成时间推迟，甚至造成异常发酵。 适宜时间：菌体处于生命力极为旺盛的对数生长期且培养液中菌体量还未达到最高峰时。;3.种龄;不同培养时间对转化酶活性的影响;在土霉素生产中，接入的一级种子种龄相差2-3hr，则转入发酵罐后菌体代谢有明显差异。 细菌：7-24hr 放线菌：21-64hr 霉菌：16-50hr;接种量指移入的种子的体积和接种后培养液的体积比。 接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中的繁殖速度。 　采用较大接种量可以缩短发酵罐中菌体繁殖到达高峰的时间，使产物形成提前。原因： 1、种子多，种子液中含有大量的胞外水解酶，有利于对基质的利用；2、生产菌迅速占据了整个培养环境，减少染菌机会。但过多，易使菌体生长过快，培养液粘度增加，溶氧降低，产物合成受影响。 如: 嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶, 接种1%，酶活最高；1.5%~4%影响不大；大于4%，酶产量明显下降。;制霉菌素生产中，1%比10%效果好，0.1%与1%效果相当。 发酵生产的趋势：采取大接种量及